高二生物植物的组织培养要点.pptVIP

生长素类 在组培中的作用：诱导细胞的分裂和根的分化。 常用种类及作用：IAA(吲哚乙酸)、 NAA、 IBA、NOA（萘氧乙酸）、 2.4－D、 2.4.5－T（三氯苯氧乙酸） 使用时先配成母液，母液的浓度一般为0.1 mg/ml或1 mg/ml；配时一般先将其粉末溶于95％乙醇或0.1 mol/L的NaOH中，再定容。 细胞分裂素类 在组培中的作用：促进细胞分裂和由callus或器官上分化不定芽。 常用种类及作用：BAP（苄氨基嘌呤）、6－BA（苄基腺嘌呤），zip（异戊烯氨 基嘌呤）和KN（激动素） 使用时先配成母液，母液的浓度一般为0.1 mg/ml或 1 mg/ml；配时一般溶于0.5或1 mol/L的HCl或稀薄的NaOH中，再定容。 3.灭菌： 通常培养基应在汽相121摄氏度的条件下在高压灭菌锅内灭菌20 min。 在高压灭菌锅的加热过程中，在气压指针上升到0.05 Mpa时，放一次气，然后在温度达121摄氏度时，保持此压力灭菌15-20 min。灭菌完成后，待灭菌锅的压力降到0时，打开灭菌锅，取出培养基，放平，待培养基凝固后备用。 接种： 在无菌的条件下，取烟草无菌苗的叶片，剪成（0.5～1cm）*(0.5～1cm)大小的小块，接种于诱导培养基MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中诱导愈伤组织，在此培养基上能诱导出愈伤组织并能够诱导出不定芽。 不定芽生根： 将在愈伤组织中生成的不定芽移栽到1/2 MS培养基中，其目的是诱导不定芽生根，使其发育成烟草小植株。 植物材料灭菌的常用药品和原理 1.乙醇： 原理：脱水作用和溶脂性，从而使Protein脱水、变性、沉淀及质膜破损、透性增加，使微生物致死。 使用浓度：70％（V/V） 灭菌时间：5－60 s 2.次氯酸盐： 原理：在水中形成次亚氯酸（HClO），HClO分解后形成盐酸和新生态氧（ HClO→HCl+〔O-〕）， 〔O-〕具有很强的 氧化性而具有杀菌作用。 使用浓度：0.5％－2.5％的有效氯 灭菌时间：5－15 min 3.升汞（HgCl2）： 原理：汞离子可与带负电荷的蛋白质结合，使菌体蛋白变性，酶失活。其杀菌效力极强。 使用浓度：0.1-0.2％（W/V） 灭菌时间：10 min 4.新洁尔灭： 原理：广谱表面活性灭菌剂。 使用浓度：1：200（V/V） 灭菌时间：30 min或更长 * 第5章 植物的组织培养 实验目的： 1.掌握植物组织培养基(MS)的配制(Murashige and Skoog)2.通过实验，掌握无菌操作方法，熟悉烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立的整个过程。 3.学习再生体系的建立方法，为掌握其他植物的组织培养奠定基础；同时为转基因技术提供一个平台。 植物组织培养基的配制 烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立 实验用品： 1.仪器和用品：500 ml试剂瓶1个；100 ml试剂瓶5个； 250 ml试剂瓶4个；高压灭菌锅；电子天平； 烧杯（大、中、小各2个）、玻璃棒、移液管、 搪瓷缸、培养瓶、电炉、pH计或精密pH试纸、 容量瓶（大、中、小各1个） 2.化学药品及试剂 汉语名 分子式 生产公司 分子量 纯度 硝酸铵 NH4NO3 上海通亚精细化工厂 80.04 分析纯 磷酸二氢钾 KH2PO4 中国江苏南京中山集团公司化工厂 136.09 硝酸钾 KNO3 上海鑫达精细化工有限公司 101.10 硫酸镁 MgSO4.7H2O 山东省化工研究院 246.47 氯化钙 CaCl2.2H2O (上海)四联化工厂 147.03 硫酸锰 MnSO4.4H2O 上海试剂工厂 169.02 硫酸锌