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第一章 透射电镜的用途 17世纪光学显微镜的发明，促进了细胞学的发展，20世纪电子显微镜的发明，揭开了病毒和细胞亚显微结构的奥妙。在20世纪60年代以来，TEM广泛应用于工农业生产、材料学、考古学、生物学、组织 学、病毒学、病理学和分子生物学等研究领域中，其应用的广度、研究的深度有如下几方面。 一、 细胞学 由于超薄切片技术的出现和发展，人类利用电镜对细胞进行了更深入的研究，观察到了过去无法看清楚的细胞超微结构。例如，用电镜观察到了生物膜的三层结构以及细胞内的各种细胞器的形态学结构等。 二、发现和识别病毒 许多病毒，尤其是肿瘤病毒就是用TEM发现的。电镜也为病毒的分类提供了最直观的依据，例如去年肆虐全球的SARS病毒就是首先在电镜下观察到并确认是病毒而不是支原体的。 三、临床病理诊断 生物体发生疾病都会导致细胞发生形态和功能上的改变，通过对病变区细胞的电镜观察就可以为疾病诊断提供有力依据。例如目前电镜在肾活检、肿瘤诊治中发挥了重要作用。 四、免疫学 电镜技术与生命科学中新兴起的技术相结合，促进了新技术的应用。例如电镜技术与免疫学技术相结合产生了免疫电镜技术，它可以对细胞表面及细胞内部的抗原进行定位，可以了解抗体合成过程中免疫球蛋白的分布情况等。 五、细胞化学 研究细胞内各种成分在超微结构水平上的分布情况以及这些成分在细胞活动过程中的动态变化，以阐明细胞的化学和生化功能。其中最主要的是蛋白质（尤其是酶的细胞内定位），其次是核酸、脂肪、碳水化合物及无机离子的定位。该技术促进了形态学和生物化学的结合，使生命科学的研究进入了新的水平。材料科学研究的对象是制造设备和产品的金属、半导体塑料及工艺技术，例如研究如何制造出更小、更的晶体管，以使计算机的功能更为强大；研究聚合物的电子特性以生产更便宜的手机显示屏；或者分析如何使肌体组织与医用植入物更好地结合。用DNA适体构建蛋白纳米结构纳米金属中空位与扩散纳囊技术应用透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像。通常，透射电镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～几十万倍用于观察超微结构，即小于0.2μm光学显微镜下无法看清的结构，又称亚显微结构。由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，必须制备超薄切片(通常为50～100nm)。其制备过程与石蜡切片相似，但要求极严格。要在机体死亡后的数分钟取材，组织块要小(1以内)，常用戊二醛和酸双重固定包埋,用超薄切片机(ultramicrotome)切成薄片，再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。成像方式与光学生物显微镜相似，只是以电子透镜代替玻璃透镜。 由钨丝阴极在加热状态下发射电子。经过电场加速形成一个直径50μm大小的电子源（相当于光学显微镜的光源）。经过双聚焦镜，发射的电子束被聚焦在样品上（电子束斑直径为3-5μm）。穿过样品的电子束经过物镜，在其像平面上形成第一幅高质量的样品形貌放大像，然后再经过中间镜和投影镜的两次放大，最终形成三级放大像而显示在荧光屏上，或当荧光屏竖起来时就被记录在照相底片上。 二、TEM的结构 TEM的结构由镜筒（电子光学系统）、真空系统、电子学系统三个主要部分组成。 （一）镜筒：按功能可分为三个系统。 1．照明系统 ??该系统分成两部分：电子枪和聚光镜。电子枪由灯丝(阴极)、栅级和阳极组成。加热灯丝发射电子束。在阳极加电压，电子加速。阳极与阴极间的电位差为总的加速电压。经加速而具有能量的电子从阳极板的孔中射出。射出的电子束能量与加速电压有关，栅极起控制电子束形状的作用。电子束有一定的发射角，经聚光镜调节后，形成很小的平行电子束。电子束的电流密度(束流)可通过聚光镜的电流来调节。 （1）电子枪 电子枪：发射电子，由阴极、栅极、阳极组成。阴极管发射的电子通过栅极上的小孔形成射线束，经阳极电压加速后射向聚光镜，起到对电子束加速、加压的作用。~0.12mm的钨丝做成的，通常做成发夹形状，当电流加热至2200-2500K时，灯丝产生热电子发射作为电子源。 阳极对阴极有一加速电压，对电子起加速作用。一般采用负高压，高压由高压发生器产生，通过高压电缆输送过灯丝。常用的加速电压为50KV、75KV和100KV，超高压电镜可达3000KV。加速电压决定电子束波长。 栅极（控制极）可以控制阴极发射电子束的形状和发射强度，对电子发射起限制和稳定的作用。 栅偏压对灯丝因加热电流的变化或加速电压的变化所引起的束流变化，有稳定的作用。而且栅偏压可以调节，通过改变栅偏压的方法可以改变图像的亮度 （2）聚光镜 聚光镜的作用