第三章 动、植物细胞培养产酶幻灯片.pptVIP

植物、动物、微生物细胞的特性比较 无血清培养基 目前，大多数动物细胞的体外培养，都不同程度地依赖血清等天然培养基。无血清培养基的研制是细胞工程中的一个重要课题。 细胞培养的目的及其在研究工作中意义： 目的是获得细胞产物 1.能长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动。 2.便于使用各种不同的研究技术对细胞进行研究。 3.易于附加物理、化学、生物药物等实验因素。 4.能同时提供大量生物性状相似的实验材料。 三、动物细胞培养方式 细胞培养是指离体细胞在无菌培养条件下的分裂、生长，在整个培养过程中细胞不出现分化，不再形成组织。 培养动物细胞的步骤 1.无菌取出目的细胞所在的组织用培养液漂洗干净； 2.用无菌刀割掉多余部分并切成小组织块； 3.小组织块置于解离液中离散细胞； 4.低速离心洗涤细胞后，将目的细胞吸移到培养瓶中。 动物细胞培养： 1.悬浮培养 2.贴壁培养 3.固定化细胞培养 方式 微导管培养法 微载体培养法 微胶囊培养法 细胞株是通过选择或克隆化培养，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊遗传、生化特性或特异标记的细胞群。 细胞系是由原先组成原代培养物的所有细胞类型组成。 小鼠组织块 ，用胰蛋白酶处理后变成单个细胞， 24h后（贴壁生长）的成纤维细胞 四、培养条件的影响与控制 1.温度：一般控制在36.5℃. 2.pH值：一般控制在7.0-7.6的微碱性范围内。 3.渗透压: 应与细胞内渗透压相同。 4.溶解氧：根据情况随时调节。 动物细胞的体外培养的条件 动物细胞的体外培养，模拟体内的条件，因此，其重要的条件可以概括为无菌、生长环境和营养。 培养的动物细胞的存活 渗 透 压 水的质量 营养条件 气体条件 温度条件 条 件 无菌条件 PH 五、动物细胞培养产酶实例 以人黑色素瘤细胞培养生产组织纤溶酶原活化剂（tPA)为例 是一种丝氨酸蛋白酶，它可以催化纤溶酶原水解，生成纤溶酶，它能催化血栓中的血纤维蛋白水解，对血栓性疾病有显著疗效。 人黑色素瘤细胞培养生产tPA的工艺过程 人黑色素瘤细胞培养 人黑色素瘤细胞培养基的配制 tPA的分离纯化 * * 第三章 动、植物细胞培养产酶 动、植物细胞培养是通过特定技术获得优良的动、植物细胞，在人工控制条件的反应器中进行细胞培养，获得所需产物的过程。 与微生物细胞相比，动物细胞和植物细胞具有各自不同的特性，需采用各自不同的培养工艺。 动物细胞模式图 植物细胞结构 动物细胞 植物细胞 疫苗、激素、单克隆抗体、酶等 醇、有机酸、氨基酸、抗生素、核苷酸、酶等 色素、药物、香精、酶等 主要产物 非常敏感 大多数不敏感 敏感 对剪切力 不要求 不要求 大多数要求 光照要求 复杂 简单 简单 营养要求 ﹥15 0.3-6 ﹥12 倍增时间/h 10～100 1～10 200～300 细胞大小/um 动物细胞 微生物细胞 植物细胞 细胞种类 三者之间的差异主要有： 植物细胞动物细胞微生物细胞。 动物细胞、植物细胞的生产周期比微生物长。 植物细胞和微生物细胞的营养要求较简单。 植物细胞的生长以及次级代谢物的生产要求一定的光照。 植物细胞和动物细胞对剪切力敏感。 植物、微生物和动物细胞的主要目的产物各不相同。 第一节 植物细胞培养产酶 1902年，德国植物学家G.Haberlandt就预言植物细胞培养的可能性。 1937年前后，法国和美国科学家分别成功的进行了胡萝卜和烟草的组织培养。 1966年Klein指出，能利用植物细胞培养物代替收集或栽培植株来生产生化制品。 近年来通过植物细胞培养产酶的研究已经取得可喜进展 一、植物细胞培养的特点 1.提高产率 2.缩短周期 3.易于管理、减轻劳动强度 4.提高产品质量 5.其他 二、培养基的特点 应用最广的是MS培养基和LS培养基 MS培养基是1962年由Murashinge和Skoog为烟草细胞培养而设计的培养基。LS培养基是在其基础上演变而来的。 三、培养方法：——悬浮细胞培养 ①细胞株的建立（外植体与愈伤组织） ②扩大培养 ③大罐培养 外植体： 从植株取出，用于植物组织培养的植物组织（包括根、茎、叶、芽、花、果实、种子等）的片段或小块。 愈伤组织： 将上述外植体植入诱导培养基中，于25℃左右培养一段时间，从外植体的切口部位长出小细胞团。 水稻的外植体（幼胚）和愈伤组织 四、培养条件的影响与控制 1.温度 2.pH 3.通气与搅拌 4.光照的控制 5.前体的添加 6.诱导子的应用 五、植物细胞培养产酶实例 以大蒜细胞培养生产超氧化物歧化酶（SOD）为例 1.大蒜愈伤组织的诱导