【2017年整理】实验十二 厌氧性细菌(1稿).docxVIP

实验十二 厌氧性细菌（厌氧培养方法）厌氧性细菌（Anaerobic bacteria）是一大群必须在无氧或低氧环境中才能生长繁殖的细菌；一般情况下，这类 HYPERLINK /view/19168.htm \t _blank 细菌在无氧条件下比在有氧环境中生长好，不能在空气（氧气浓度大于18%）和（或）二氧化碳浓度小于10%以下的 HYPERLINK /view/1368084.htm \t _blank 固体培养基表面生长。这类细菌缺乏完整的 HYPERLINK /view/1654496.htm \t _blank 代谢酶体系，其能量代谢多以无氧发酵的方式进行。它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、 HYPERLINK /view/3167.htm \t _blank 中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、 HYPERLINK /view/63078.htm \t _blank 心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性 HYPERLINK /view/43237.htm \t _blank 关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、 HYPERLINK /view/3172908.htm \t _blank 肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。（一）无芽胞厌氧菌主要种类及生物学性状 　　无芽胞厌氧菌共有23个属，与人类疾病相关的主要有10个属。　　1.革兰阴性厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要。形态呈多形性，有荚膜。除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢。　　2.革兰阴性厌氧菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要。为咽喉部主要厌氧菌，但在临床厌氧菌分离标本中，分离率小于1%，且为混合感染菌之一。其他革兰阴性球菌极少分离到。　　3.革兰阳性厌氧菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道。本菌属细菌生长缓慢，培养需5～7天。　　4.革兰阳性厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主：　　（1）丙酸杆菌属：小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2～5天，与人类有关的有3个种，以痤疮丙酸杆菌最为常见。　　（2）双歧杆菌：呈多形性，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸。29个种中有10个种与人类有关，其中只有齿双歧杆菌与龋齿和牙周炎有关。其他种极少从临床标本中分离到。　　（3）优杆菌属：单一形态或多形态，动力不定，严格厌氧，生化反应活泼，生长缓慢，常需培养7天，最常见的是迟钝优杆菌。　　（二）微生物学检查　　要从感染灶深部采取标本。最好是切取感染灶组织或活检标本，立即送检医.学教育网搜集整理。　　1.直接涂片镜检：将采集的标本直接涂片染色镜检，观察细菌形态、染色及菌量，为进一步培养以及初步诊断提供依据。　　2.分离培养与鉴定：分离培养是鉴定无芽胞厌氧菌感染的关键步骤。标本应立即接种相应的培养基，最常用的培养基是以牛心脑浸液为基础的血平板。置37℃厌氧培养2～3天，如无菌生长，继续培养1周。如有菌生长则进一步利用有氧和无氧环境分别传代培养，证实为专性厌氧菌后，再经生化反应进行鉴定。厌氧菌广泛分布于自然界以及人和动物的体内，具有以下特点：1、种类繁多，分类方法多。（1）按照形态厌氧性细菌分为芽胞厌氧菌和无芽胞厌氧菌两大类。芽胞厌氧菌只有一个菌属，即梭状芽胞杆菌属，共有100多个种；无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个种和亚种。（2）根据对O?的耐受程度，可将厌氧菌分为3大类：（1）对氧极端敏感的厌氧菌：代表菌种为月形单胞菌。这类细菌对厌氧条件要求很高，在空气中暴露10min即死亡，临床上很难分离出；（2）中度厌氧菌：代表菌种为 HYPERLINK /view/356077.htm \t _blank 脆弱拟杆菌、 HYPERLINK /view/426097.htm \t _blank 产气荚膜梭菌等临床分离常见的厌氧菌。它们在空气中暴露60～90min或在脓汁抽出72h后仍然能分离出来；（3）耐氧厌氧菌：代表菌种为溶组织梭菌。这类细菌不能利用氧，在无氧条件下生长好，而在有氧条件下生长不佳。也有按照其对氧的耐受的程度不同，可分为专性厌氧菌和兼性厌氧菌等。专性厌氧菌（Obligate anaerobe），是指在无氧的环境中才能生长繁殖的细菌。此类细菌缺乏完善的呼吸酶系统，只能进行无氧发酵，不但不能利用分子氧，而且游离氧对其还有毒性作用。如破伤风杆菌、肉毒杆菌、产生荚膜杆菌等。 只能在没有游离氧存在的环境中生存的微生物。甲烷菌即属此类细菌。人们利用甲烷菌等产生沼气，利用厌氧菌处理各种有机废物和废水。如梭菌、甲烷菌、硫酸盐还原菌以及大部分光合细菌。与此相反，无论有氧状态还是无氧状态都能生长发育的细菌，则称它为兼性厌氧细菌（facultative obligate anaerobe）。专性厌氧菌除通