醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质__培训课件.pptVIP

* * 实验六 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 临床生化实验室 一、实验目的 1. 掌握电泳分离的蛋白质的基本原理 2. 熟悉醋酸纤维薄膜电泳技术 二、实验原理（一） 电泳：带电粒子在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。 电泳技术: 利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术。 二、实验原理（二） 蛋白质是两性电解质。血清中各主要蛋白质的等电点均低于pH7.0，在pH8.6的碱性缓冲液中，电离成负离子，在电场中向正极泳动。 因血清中各种蛋白质的pI值不同，在同一pH缓冲液中带电荷量会有不同，此外，各蛋白质的分子大小和形状也不一致，所以在同一电场中，各蛋白质的电泳迁移率也不同。带电荷多、分子量小者，泳动较快，反之则慢。 醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白分成五条主要区带，从正极端起依次为清蛋白/白蛋白Alb， α1-球蛋白，α2-球蛋白，β-球蛋白, γ-球蛋白。这些蛋白经过染色处理，可展示出清晰的蛋白电泳图谱。如下图所示。 二、实验原理（三） 由于染色时，染料与蛋白质的结合与蛋白质的量成正比。因此可将实验图片扫描后，根据每个蛋白条带的光密度，采用软件计算每种蛋白质的相对含量。 也可将各蛋白区带剪下，分别用一定量的NaOH稀溶液洗脱，进行比色，测出各蛋白质区带的相对含量。 二、实验原理（四） 蛋白定量： 影响电泳的因素 三、实验器材 卧式电泳槽 DYY-2型电泳仪 醋酸纤