2-3章.ppt.ppt

* * 第四节 细菌和链霉菌的分子克隆载体 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一、革兰氏阴性菌克隆载体 1. 移动载体（mobilizable vector） 1)?特点 i. 广谱宿主范围，即复制子和遗传标记具很宽适应范围 ii. DNA的转移常常需要经过中间宿主细胞和借助于辅助质粒，DNA进入中间宿主细胞可用直接转化 2)?结构 i. RK2质粒的结构 a. oriV DNA复制起点 b. DNA复制基因 c. DNA转移基因 d. oriT DNA转移基因 e. 药物抗性基因（Apr Kanr Tcr） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. G+菌的质粒和载体 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. ⅱ. 移动载体与辅助质粒 pRK2013: 将RK2中的全部转移基因和Kanr基因插入到 E.coli的colE1质粒中构成辅助质粒 pRK290: 余下部分（Apr除外）构成移动载体（约20Kb） * 当选用E.coli为中间宿主时，必须先将pRK290经过直接转化引入E.coli（pRK2013也应转入同一细胞）。当要转移pRK290时，只需将E.coli细胞与其他G‐细胞混合，在pRK2013的作用下，pRK290可接合转移至终宿主细胞。 3)??不相容群（incompatibilitiy group）克隆载体 ⅰ. P群：RP4 RK2 RP1 R68 2-5拷贝 ⅱ. Q群：R300B RSF1010 R1162 15-20拷贝 ⅲ. W群：Sa 2-5拷贝 4）遗传标记基因 大多数为抗生素标记基因，要注意不同G‐菌中的表达活性 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. G-细菌中重组质粒的转移 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2. 非移动载体(non-mobilizable vector) 1) 特点：不能接合转移，但可经过直接转化进入那些可形成感受态的细菌，具有广谱和窄谱两大类载体 2) 实例： P4D0105-由E.coli噬菌体P4构建而成，适合于E.coli和肺炎克蕾伯氏菌。 ⅰ. 当辅助噬菌体提供P4整合酶时，该载体可整合到E.coli染色体中，整合入肺炎克蕾伯氏菌染色体则与整合酶无关。 ⅱ. 该载体含有一个virl突变和在引物酶基因α中存在一个琥珀突变(am52)，在无抑制子突变的菌株中，该载体不能自主复制，但在有抑制子突变的菌株中(琥珀抑制子突变体），该载体则可自主复制。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. P4D0105载体的结构 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5