植物组织养复习笔记.docVIP

植物组织培养复习资料 绪论 植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官，组织，细胞以及原生质体，培养在人工培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。外植体：在无菌条件下，离体培养于人工培养基上的，用于达到某种培养目的的原始植物料。培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配制的营养基质即为培养基。细胞全能性：植物体每一个细胞都含有该植物全部的遗传信息，在合适的条件下，具有形成完整植株的能力。脱分化：一个成熟细胞恢复到分生状态或胚性细胞状态的现象。再分化：是脱分化细胞重新恢复细胞分化能力，沿着正常的发育途径，形成具有特定结构和功能的细胞。组织培养的类型，不同分类依据。根据培养材料不同可分为植株培养，胚胎培养，器官培养，组织或愈伤组织培养，细胞或原生质体培养5类；根据培养目的可分为试管嫁接，试管受精，试管加倍，试管育种等；根据培养方法可分为平板培养，微室培养，悬浮培养，单细胞培养等；根据培养过程可分为初代培养和继代培养；根据培养基类型可分为固体培养和液体培养。三个发展阶段的关键人物。1，haberlandt于1902年提出植物细胞全能性理论组织培养之父2，white于1943年出版《植物组织培养手册》3，murashine和skoog在1962年筛选出MS培养基四、植物全能性表达的过程培养脱分化再分化培养组织培养的特点1、植物基础学科研究的良好系统2、生物技术的基础3、经济高效，管理方便，利于自动化4、技术含量高，实验误差小，人工控制能力强5、生长周期短，生长速度快，实验重复性好6、实验材料经济，来源单一缺点需要设备负复杂，投入资金多，电能消耗大；对人员技术水平要求高，对实验场所要求也高，不能代替田间试验。第二章?植物组织培养设备与培养条件实验室的组成及主要仪器和设备准备室干燥箱，高压灭菌锅，电子天平，酸度计，水浴锅，冰箱。接种室超净工作台，紫外灯，接种工具培养室培养架，摇床，控温控光设备植物组织培养所需要的环境条件温度一般植物生长的最适温度在23~27℃之间2、光照光照16h,接着8h的黑暗培养，光照强度一般在1000~5000Lx。湿度一般要求70%~80%4、气体低氧有利于胚状体的形成；高氧有利于根的形成；高浓度乙烯对正常的形态发生不利5、培养基渗透压培养材料和培养基之间处于等渗或略低于培养基渗透压6、pH值常在5.6~5.8.调高不调低三、物理灭菌的方法及条件有哪些？化学灭菌的药剂有哪些？物理灭菌湿热灭菌：利用高压蒸汽实现灭菌。在118kPa的压力下，121℃，维持20分钟。干热灭菌：利用烘箱烘烤灭菌的方法。160℃，灭菌时间2~3小时过滤灭菌灭菌：紫外线照射灭菌离心沉淀，大量无菌水反复冲洗等技术。化学灭菌升汞酒精次氯酸钠来苏水高锰酸钾双氧水漂白粉抗生素等四、高压灭菌锅的使用级注意事项（1）首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。2）放回灭菌桶，预热。装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果，或堵塞排气孔。3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。4）用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，此操作重复两次。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。121.3℃，20分钟灭菌。5）灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。6）将取出的灭菌培养基放入?37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。（仅供参考） 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞的DNA一起复制。热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去传染能力。 热处理是一种物理效应，与冷处理一样可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜处于优势地位。 方法: 愈伤组织热处理 热空气处理脱毒法 2. 微茎尖培养脱毒 （1） 原理： 病毒在植物体内分布不均匀，越接近顶端分生组织，病毒浓度越稀，因此可以采用小茎尖的离体培养脱除植物病毒。 . 病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争，在迅速合成的植物细胞中正常合成的蛋白质占优势。 （2） 方法： 外植体经表面灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。 3. 愈伤组织培养脱毒法 （