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生物反应工程综述 ——植物细胞培养技术应用研究进展 班级： 学号： 姓名： 摘要：近年来，植物的次生代谢物的结构、功能与应用越来越受人们的关注。本文简要介绍植物细胞培养，综合概述植物细胞培养技术提高次生代谢物产量的几种方法，并对其应用前景进行展望。 关键词：细胞培养技术；植物次生代谢产物；进展；展望 前言 植物细胞培养是在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于 液体培养基中进行震荡培养，得到分散成游离 的悬浮细胞，通过继代培养使 细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种技术。植物细胞培养技术经过近百年的发展，已经成为一门精细的实验科学，在选材消毒、接种培养、诱变筛选、继代保存、分离鉴定以及深层培养发酵生产次生代谢产物方面，已建立了标准的操作流程。 植物细胞培养技术 2.1原理 植物细胞培养的原理：植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物的全能性。植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物组织培养按其原始意义，就是指愈伤组织培养。但发展至今，其范围日益扩大，已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养。 2.2分类 2.2.1?固定化培养技术：植物细胞固定化是将植物细胞包裹于一些多糖或多聚化合物上进行培养，并生产有用代谢物的技术。是由Brodelius等人于1979年首次生产植物次生代谢物应用成功的。与悬浮培养相比，它具有提高反应效率、延续反应时间及保持产物生产的稳定性等特点。? 2.2.2两相培养技术：在培养体系中加入水溶性或脂溶性有机物或者具有吸附作用的多聚物使培养体系分为上下两相，细胞或组织在水相中生长和合成次生代谢物质，次生代谢物质分泌出后再转移到有机相中，然后再从有机相分离植物次生代谢物的技术，称为两相培养技术。? 2.2.3反义技术：根据碱基互补原理，人工合成或生物体合成特定互补DNA或RNA片段，抑制或封闭某些基因表达的技术，通过此技术，可以将反义DNA或RNA片段导人植物细胞，使催化某一分支代谢的关键酶活性受抑制或加强，从而提高目的物的含量，同时抑制其他化合物合成。? 2.2.4冠瘿培养技术：利用根癌农杆菌感染植物可以将Ti质粒的T—DNA片段(含有诱导冠瘿组织发生的tms基因和tmr基因)整合进入植物细胞的基因组，诱导细胞冠瘿组织的发生。? 2.2.5毛状根培养技术：毛状根是双子叶植物各器官受发根土壤杆菌(A?grobacterium?rhizogenes)感染后产生的病态组织。感染过程中，发根农杆菌Ti质粒T?—DNA转移?并整合到植物基因组中。具有激素自养，增殖速度快，次级代谢产物含量高且稳定等特点。? 2.2.6添加诱导子或引导物技术：诱导子是一种能引起植物过敏反应的物质，当它在与植物的相互作用时，能快速、高度专一和选择性地诱导植物特定基因的表达，进而活化特定次生代谢途径，积累特定地目的次生代谢物，从而提高植物次生代谢产物的产量。? 2.2.7植物细胞悬浮培养生物反应器技术：生物反应器技术具有很多优点：工作体积大、单位体积生产能力高、物理和化学条件控制方便等。 3.植物细胞培养的应用现状 目前植物细胞大量培养主要应用于以下三个方面：? 3.1细胞代谢产物?主要集中在研究制药(如如抗癌药物紫杉醇、疗伤药物紫草宁、保健药物人参皂甙等)、油料(如如豆寇油、春黄菊油等)、食品添加剂(如生姜、香子兰等)、调味剂(如胡椒、留兰香等)、食用色素(如花青素等)、饮料(如咖啡、可可等)、树胶(如阿拉伯胶等)。? 3.2?人工转化?通过植物细胞培养生产有用化合物的另一方面是植物细胞分泌的酶的催化——?生物转化，但由于在酶的生物转化大规模培养方面遇到传代细胞变异的问题，难于实现大规模的工业生产，因此发展缓慢。? 3.3人工种子?人工种子一词是美国学者Murashige1978年在第四届植物组织及细胞培养会议上提出的。植物人工种子研制包括：体细胞胚诱导、体细胞胚胎发生的同步控制、体细胞胚大规模培养、人工种皮的研究、人工种子的包埋、人工种子的储存和干燥等六项。由于体细胞胚质量、人工种皮的营养供给及通气、抵抗污染等技术问题，人工种子的研究仍只处于实验室阶段。? 4.展望? 植物细胞培养进行有效成分的生产发展到现在，已经取得了令人瞩目的成就。自从20世纪90年代以来，利用植物细胞工程进行天然产物的生产进入了一个新的发展阶段，它与基因工程、快速繁殖形成了三大主流。20世纪90年代全世界已经有1?000多种植物被进行过细胞培养方面的研究。但是，植物细胞是一个复杂的体系，细胞内部存在多种的正反馈和负反馈调控机制，细胞的各种亚体系之间也存在着复杂的相互影响，相互偶联关系；植物细胞在培养过程中的生长缓慢、不耐剪切力、目标代谢产物含量低等自身特点同时