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第二章 克隆 第二节 动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体制备 * 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养、植物体细胞杂交 发展历史: 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 一、动物细胞培养 1、培养过程 分散成单个细胞 （胰蛋白酶） 细胞贴壁，出现接触抑制 原代培养与传代培养（目前使用的通常为10代以内的正常细胞） 胰蛋白酶处理 2、培养条件： 无菌、无毒： 营养： 温度、PH： 气体环境： 3、应用： 蛋白质生物制品 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 健康细胞培养 如烧伤病人的皮肤细胞培养和移植 细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物 无菌处理、添加抗生素、定期更换培养液 糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清等 体温、中性 95%空气 + 5%CO2 （维持pH） 问题 为什么对动物细胞进行培养时要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。有些氨基酸是必需氨基酸，必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子；血清还含有多种未知的促细胞生长因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。 细胞的全能性 细胞群 个体、细胞群 培养结果 科研、获得细胞产物等 繁殖、育种、获得细胞产物等 培养目的 促生长因子、动物血清 植物激素、水 培养基特有成分 细胞分裂 原理 动物细胞培养 植物组织培养 植物组织培养和动物细胞培养的比较 Normal cell Cancer cell 细胞贴壁：细胞贴附在瓶壁上生长的现象。 接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。 世界上第一个细胞培养生产的流感疫苗上市? 2007-06-13 全球最大的生物制药公司之一诺华（NYSE:??NVS）在2007年6月13日宣布，欧盟已经批准其流感疫苗Optaflu上市。 Optaflu??是第一个由细胞培养而非鸡胚生产的疫苗，能够迅速扩大生产能力以应对大流行。Optaflu的上市标志着50年流感疫苗生产史最重大的创新之一。 诺华说，临床研究已经证实，细胞培养生产的疫苗在刺激免疫系统和耐受性等方面与传统鸡胚生产的疫苗一致。Optaflu为肌注。 用于生产流感疫苗的病毒一直是在受精鸡蛋(鸡蛋胚胎)中培养的。但这存在一些问题：一方面，对鸡蛋要求严格，不是每只鸡蛋都可以用来生产疫苗，只有经过认证的养鸡厂才可以提供此类鸡蛋；另一方面，每只受精鸡蛋一次只能注射一个病毒菌株，但是典型的流感病毒包含三个菌株。不仅如此，现有方法需要大量的受精鸡蛋。如果为所有美国人生产流感疫苗的话，则需要2.7亿只受精鸡蛋，一旦鸡蛋有问题，整个疫苗计划就会失败。 更为重要的是，新的细胞培养法有助于人类灵活应对大规模暴发的流感。近年来，高致病性禽流感的爆发总让人担心届时疫苗够不够用。用鸡蛋培养病毒的话，生产多少疫苗必须提前做出精确计划，但一般来说流感暴发时，人们很难在短时间内购置生产疫苗所需的数百万只鸡蛋。而新方法可在很小的生产空间，很快地制造出大批纯净的疫苗。 * * *