任务五 高效液相色谱仪的使用.ppt

五、结 果 分 析 2、定量分析 以峰面积定量，根据公式计算样品中苯甲酸的含量。 W——样品中苯甲酸的含量， μg/mL； A——样品中被测物质的峰面积； As——标准样品中被测物质的峰面积； C——标准样品的浓度， μg/mL； V2——样液定容体积，mL； V1——所取样液体积。 六、注 意 事 项 1、流动相必须使用色谱纯试剂，使用前用0.45μm膜或更细的膜过滤，并超声脱气，恢复到室温后使用。 2、不能用纯乙腈作流动相，防止单向阀粘住导致泵不进液。 3、长时间不用仪器，应将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存，应该用有机相（如甲醇等）保存。 4、C18柱绝对不能进蛋白样品、血样、生物样品。 六、注 意 事 项 5、注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 6、更换流动相时，应先将吸滤头部分放入烧杯中，边振动边清洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶相的流动相时要用异丙醇过滤一下。 7、气泡会致使压力不稳，重现性差，在使用过程中尽量避免产生气泡。 实训技能考核标准 100% 合计 5% 按规定着装、能够正确进行标识、注意操作文明；注意操作安全。 其他操作 30% 原始记录及时规范整洁；有效数字准确；定性分析正确；计算准确。 结果分析 50% 能够正确仪器操作，包括开关机、设置参数、建立方法、测量；操作熟练安全。 上机测量 5% 注射器的正确使用；微孔滤膜器的正确使用；熟练操作。 滤膜过滤 5% 超声波仪的正确使用能够精密移取，达到熟练程度。 脱气处理及定容 5% 吸量管的正确使用；达到熟练程度 样品移取 样 品 处 理 高 效 液 相 色 谱 仪 的 使 用 分值比例 考核重点 考核内容 项目 《仪器分析》课程 ——生物工程系 任务五 高效液相色谱仪的使用 了解高效液相色谱法的主要特点及其适用范围 了解高效液相色谱仪的构造 掌握高效液相色谱法的使用技术和定量方法 学 习 目 标 一、 概 述 高效液相色谱法（HPLC）：以气相色谱为基础，在经典液相色谱（LC）实验和技术基础上建立的一种液相色谱法。 （一）HPLC的特点 （二）与经典LC相比HPLC的优点 （三）HPLC的适用范围 高压——压力可达150 ～300kg/m2； 高速——流速为0.1～10.0mL/min； 高效——柱效高，在一根柱中同时分离成分可达100种； 高灵敏度——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 （一）HPLC的特点 （二）与经典LC相比HPLC的优点 速度快——通常15～30min一个样，某些样品5min可完成； 分辨率高——可选择固定相和流动相达到最佳分离效果； 灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg； 柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物； 样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏。 （三）HPLC的适用范围 适合分析高沸点、热不稳定、离子型的样品 ； 应用范围广泛，适用于医药、环保、石化、生命科学、食品工业、农业等多个领域； 在已知的化合物中能用液相色谱分析的可占70～80%。 一 二、 结 构 （一）工作流程 高压输液系统 色谱柱系统 （数据记录处理系统）工作站 检测系统 进样系统 动画 （二）工作系统 1、 高压输液系统 主要部件：贮液器、过滤器、 高压输液泵、梯度淋洗装置 （二）工作系统 2、进样系统 流路中为高压力工 作状态，通常使用耐高 压的六通阀进样装置。 动画 （二）工作系统 3、色谱柱系统 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 （二）工作系统 4、检测器系统 紫外检测器 荧光检测器 示差折光检测器 光电二极管阵列检测器 （二）工作系统 5、色谱工作站 以VI2010色谱工作站（软件操作示范）为例：此工作站适用范围广，支持多个检测器：可与任何气相色谱仪、液相色谱仪或带电压输出的电子设备连接，可同时采集一到两个独立检测器信号。 三、 使 用 技 术 准 备 清洗、关机 冲洗柱子冲洗管路关主机 关电脑 关电源 开机、进样 流动相 标液 样液 柱子选择 仪器检查 开电脑、主机、工作站 参数设置 方法建立 进样 操 作 步 骤 1、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。