分离分析化学3-1溶剂萃取法全解.ppt

研究最多的几种典型双水相系统 双水相系统的分类 按照物质在双水相系统的分配作用类型，可分为空间排阻分配、电化学分配、构型相关性分配、亲和分配、疏水分配和手性分配等类型。 3.2.3 影响分配平衡的参数 成相聚合物的浓度： 接近临界点，蛋白质均匀分配于两相，K接近1； 成相聚合物总浓度增加，系统远离临界点，两相性质差别增大，蛋白质趋向一侧分配，K或大于1，或减小低于1。 聚合物分子量的影响 3.2.3 影响分配的参数 温度：影响相图，影响分配系数。 荷电PEG作为成相聚合物： 在聚合物上引入电荷可增大两相间的电位差。 盐类 pH值 盐浓度对分配系数K的影响 盐类的影响： 在两相间形成电位差，对带电生物大分子产生很大影响。 pH值： 改变盐的解离程度（如磷酸盐），进而改变相间电位差。 pH值对分配系数K的影响 pH值： 改变蛋白质所带的电荷的性质和大小，这是与蛋白质的等电点相关的； PEG/盐系统的分配系数的调节 3.2.4 双水相萃取技术的应用 主要用于胞内酶的提取、精制； 用双水相萃取技术处理细胞匀浆液： 可方便除去细胞碎片，使酶得到精制。 蛋白质在多数情况下收率能达90%； 从微生物细胞萃取的酶 （ 续前 ） 亮氨酸脱氢酶 球形牙孢杆菌 PEG/粗Dex 20 9.5 98 2.4 D-乳酸脱氢酶 乳杆菌 PEG/盐 20 4.8 95 1.5 L-2-羟基异癸酸脱氢酶 乳杆菌 PEG/盐 20 10 94 16 D-2-羟基异癸酸脱氢酶 干酪乳杆菌 PEG/盐 20 11 95 4.9 NAD-激酶 纤维二糖乳杆菌 PEG/盐 20 - 100 3.0 亮氨酸脱氢酶 蜡状牙孢杆菌 PEG/盐 20 15 98 1.3 富马酸脱氢酶 产氨短杆菌 PEG/盐 20 3.3 83 7.5 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 明串珠菌 PEG/盐 35 6.2 94 1.3 甲酸脱氢酶 假丝酵母 PEG/盐 33 4.9 90 2.0 甲酸脱氢酶 ? PEG/粗Dex 20 7.0 91 nd 甲醛脱氢酶 ? PEG/粗Dex 20 11 94 nd 异丙醇脱氢酶 ? PEG/盐 20 19 98 2.6 酰基芳香酰氨酶 荧光假单孢菌 PEG/盐 15 30 95 3.0 多步双水相萃取分离纯化的酶 在医药工业中的应用 从发酵液中将丙酰螺旋酶素与茵体分离后进行提取，可实现全发酶液萃取操作。 采用PEG／Na2HPO4体系，最佳萃取条件是PH=8.0～8.5，PEG2000(14％)／Na2HPO4(18 ％)，小试收率达69.2 ％，对照的乙酸丁酯萃取工艺的收率为53.4％。 丙酮和乙醇双水相萃取、荧光法测定痕量维生素B2 丙酮- 硫酸铵-水和乙醇-硫酸铵-水体系双水相萃取 萃取率分别为97.16 %～98.14 %和94.12 %～95.15 %; 检出限分别为0.031 和0.041μg 该方法已成功用于片剂和注射液中维生素B2 的测定 思考题 双水相体系是怎样形成的？萃取原理？ 双水相萃取的影响因素有哪些？ 若D＝1，则萃取一次的萃取百分率为50％； 若要求萃取百分率大于90％，则D必须大于9。 当分配比D不高时，一次萃取不能满足分离或测定的要求，此时可采用多次连续萃取的方法来提高萃取率。 在含有被分离物质的水溶液中，加入萃取剂和与水不相混溶的有机溶剂，震荡，利用物质在两相中的分配不同的性质，使一些组分进入有机相中，使另一些组分仍留在水相中，从而达到分离的目的。 基本原理：相似相溶（Like dissolves like） （1）萃取：利用物质在两种不互溶（或微溶） 溶剂中溶解度或分配比的不同来达 到分离、提取或纯化目的的一种操作。 （2）以从水溶液中萃取有机物为例 1.为什么溶质会转移？ 2.如何达到分配平衡？ 任务：选择适当的萃取剂，在适当的条件下，促 使物质由亲水性向疏水性转化。 水合离子的正电性被中和，亲水的水分子被疏水有机大分子取代 水合离子的正电性被中和，亲水的水分子被疏水有机大分子取代 水合离子的正电性被中和，亲水的水分子被疏水有机大分子取代 协同萃取机理—溶剂化机理 如果金属的配位数没有饱和，只有一部分被萃取剂A配位，剩下的配位部分被水分子占据，当加入中性萃取剂S后，S取代水分子，形成A和S的协同萃取体系。 Y