2014梅毒检测概览.ppt

梅毒血清反应的假阳性反应 （1）梅毒血清反应假阳性的分类 ①技术性假阳性反应 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。 ②生物学假阳性反应 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 （2）急性生物学假阳性反应 很多非梅毒螺旋体感染性疾病，如风疹、水痘、传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺炎球菌性肺炎、亚急性细菌性心内膜炎、活动性肺结核、丝虫病和沟端螺旋体病等。 （3）慢性生物学假阳性反应 可持续6个月以上或数年，甚至终生。 咨询电话：0851－5666207 材 料(以RPR为例) RPR试剂盒：含RPR抗原；直径为18mm圆圈的特制白色反应卡片；标准针头（60±1滴/mL）；RPR试验结果图片。　　 其他：水平旋转器。 定性试验 a. 吸取0.05 mL血清或血浆加于卡片圈内，并均匀地涂布在整个圈内（每张纸卡有10个或12个反应圈）；　　b. 将抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本加1滴抗原；　　c. 将卡片置水平旋转器旋转8 min；　　d. 立即在明亮光线下观察结果。 结果　　中到大的黑色絮状物，液体清亮 3+~4+ 强阳性　　小到中的黑色絮状物，液体较清亮 2+ 阳性　　小的黑色絮状物，液体混浊 1+ 弱阳性　　仅见活性炭颗粒集于中央一点或均匀分散 － 阴性 定量试验 RPR定量试验与TRUST试验相同。 a.在圈内加入0.05 mL等渗盐水（一般作6～8个稀释度）勿将盐水涂开； b. 吸取0.05 mL血清或血浆作系列稀释（1:2～1:64），当稀释到最后的第6孔时，弃去0.05 mL稀释液。从第6孔起将血清稀释液涂布整个圈内，再涂布第5孔，依此向前到第1孔。 c. 滴加抗原，旋转时间、速度和观察结果同定性试验。 RPR试验结果 （二）梅毒螺旋体抗原血清试验 梅毒螺旋体血清试验方法有: 1.TPHA(梅毒螺旋体血凝试验) 2.TPPA（明胶颗粒凝集试验） 3.FTA－ABS（荧光抗体吸收试验） 4.TP-ELISA（免疫吸附试验） 5.TP-WB－TP和TPLA（蛋白印迹试验） 方法简便，结果易读，适用于大量标本的检测。 FTA－ABS试验是“金标准”试验，具有敏感性高，特异性强等特点。不能作为观察疗效 优点：特异性高， 对非特异性试验进行证实 缺点：不能区分是新发感染或治疗后， 通常终身持续阳性 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）原理:TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应。明胶颗粒为玫瑰红色，便于肉眼观察结果。 材 料（以TPPA为例） a. TPPA试剂盒：含蒸馏水（标记A），用于溶解致敏颗粒、未致敏颗粒和质控血清；标本稀释液（标记B），用于稀释血清标本；致敏颗粒（标记C），冷冻干燥品，用前30 min按规定量加A液溶解并混匀；未致敏颗粒（标记D），冷冻干燥品，用前30 min按规定量加A液溶解并混匀；质控血清（标记E），冷冻干燥品，用时按规定量加入A液。 b. 其他：U型微量反应板；微量加样器 (25μL )；微量滴管 (C和D管)；移液管 (微量移液管和刻度滴管)；微量板振荡器。 梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） 试验前试剂应恢复到15℃~30℃。 a. B液加至微量反应板孔内，第1孔100μL， 第2孔25μL，第3、4孔各25μL；b. 取血清25μL加至第1孔，混匀后取25μL 至第2孔，混匀后取25μL至第3孔，混匀后 取25μL至第4孔，混匀后弃去25μL。c. 第3孔加D液（未致敏颗粒）25μL， 第4孔加C液（致敏颗粒）25μL；d. 将反应板置振荡器振荡30 s；e. 置有盖湿盒，15～25℃避光孵育2h后， 观察结果。 定量试验 a. 加B液至微量反应板孔，第1孔～第4孔与定性试验相同，第5孔～第10孔各加25μL；b. 取血清25μL加至第1孔，如定性试验稀释方法，从第2孔～第10孔混匀，混匀后第10孔弃去25μL；c. 第3孔加D液25μL，第4孔～第10孔各加C液25μL；d. 以后步骤同定性试验。结果以最高血清稀释度能产生阳性反应的稀释度为抗体滴度 结果颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 阳性 4+颗粒光滑覆盖大部分孔底 阳性 3+颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环 阳