武汉大学动物细胞工程复习题..docVIP

1 《动物细胞工程》的基本概念及主要研究内容。 1 从山羊身上取出支原体细菌体，再将该细菌体的内部掏空，备用。 　　2 研究人员通过邮购目录购买DNA片段，随后用4个瓶子装上含此DNA片段不同序列的物质。 　　3 含DNA片段不同序列的瓶装物质被放入酵母液中，使其重新组合形成人造DNA。 　　4 人造DNA被植入备用的支原体细菌体中，随后该细菌体会分裂成两个子细胞，一个含人造DNA，一个具有天然DNA。 　　5 向培养皿中加入抗生素，导致具有天然DNA的细胞被杀死，而含人造DNA的细胞得以存活。 　　6 支原体细菌体中的原有天然DNA被彻底清除，最终由人工DNA支撑其恢复生命机能，自此“人造细胞”得以生成。 1604年荷兰人詹森把两块磨好的透镜同轴间隔一定距离装在铜管子里，用它来看书本上的字，字被放得很大。詹森因此成为显微镜的奠基人。 荧光的有无、色调比较进行物质判别发荧光量的测定对物质定性、定量分析最早是从水母中分离出来的, 当其受到紫外或蓝光激发时，可以发出绿色荧光。其基因可在异源组织中表达并产生荧光良好的物理特性及荧光特性而成为良好的报告基因和荧光标记分子,并在探索生命现象过程中得到了非常广泛的应用。 可用在活细胞中直接观察蛋白质细胞器中运动既具有敏感的标记检测率，又没有放射性的危害易于构建载体且对活细胞无毒害，对目的基因的功能也没有影响转化后细胞可以继续传代。 报告基因的选择取决于特定的研究目的以及分析的可行性 （敏感性、可信度、可检测性以及动力学性质）， 报告基因的稳定性将决定其是否适合转录的动态研究、 高通量研究以及在转基因实验中全或无式的基因表达研究。例如， 萤火虫 Luc 和海洋腔肠 Luc由于对蛋白质水解的敏感性， 其半衰期较氯霉素乙酰转移酶 （CAT） 要短,这样的特性使其更适合转染效率和动力学研究；再如，野生型GFP 与 Luc相比，荧光信号的线性范围较窄， 这就不大适合转录的定量研究； GFP 由于缺乏酶促扩大效应， 因此其灵敏性较 Luc要差，这就使其局 限 于 那 些 只 有 高 表 达 的 基 因 研 究， 而且GFP在细胞内的累积使其更不适合高通量的筛选。 目前已使用双报告基因系统，例如：萤火虫和海洋腔肠双LUC (fluorescence in situ hybridization)将DNA用特殊修饰的核苷酸分子标记(如biotin-dUTP或dig-oxigenin-Dutp)作为探针分子特异结合来检测该DNA染色体上的位置。具有不需放射性同位素、实验周期短和检测灵敏度高的优点。已被广泛应用于动植物基因组结构的研究,染色体结构的分析和DNA谱的构建等。 12 细胞周期。 由一个细胞增殖分裂为两个细胞的过程.在这个过程中染色体复制一次,随后随着细胞分裂平均分配到两个子细胞中,这个周期分为G1;S;G2;M四个时期,G1,S,G2为细胞间期,M为分裂期. 13 细胞周期的关键调控点。 G1--?S(存在于G1之内,控制细胞进行复制的关键点) G2--?M(存在于G2之内,控制细胞进行分裂关键点) 14 G0期细胞及其生物学意义。 位于细胞周期中G1后段,而且存在G1--?G0的转化过程,G0细胞处于静止状态,不进行分裂.在G1--?S关键点,细胞要做出是否进入下一次分裂或处于静止状态G0的决策. 如,部分肝脏细胞,一定时期乳腺细胞.另外有一部分细胞属于终端分化细胞,如神经细胞,肌肉细胞等 总之,分裂细胞+终端分化细胞+G0细胞=机体和组织细胞活动多样性. 15 细胞系及其特性。 在体外培养条件下,可以永久进行繁殖的细胞,这种细胞可以无限传代,称为细胞系. 特点: 可以提供大量的同一类型的细胞,有利于研究工作 可以大量分离细胞产物,用于企业化生产 可以长期并存于液氮之中,需要时可以解冻复苏 细胞系细胞多数为非整倍染色体,个别为二倍体,如WI-38. 16 细胞操作的无菌技术的原则，含义及其内容。 原则:保证细胞培养皿,培养瓶内部,吸管包装层内部,以及培养基的无菌状态,这一点十分重要,它包括: 工作环境以及表面处理 实验者的操作技术 细胞培养所用的玻璃以及塑料制品的处理 培养基的无菌处理 消毒与灭菌 超净工作台:用75%乙醇擦洗,紫外灯灭菌30-50分钟 无菌间:用30W的紫外灯30-50分钟 玻璃器皿:新器皿用5%HCl泡12h用过的器皿用酸剂浸泡,煮沸,清洗,浸泡,清洗,晾干,灭菌 其它器皿:橡胶,塑料器皿用专用洗涤剂清洗以后,2%NaOH浸泡过夜,5%HCl泡30分钟,清洗晾干,灭菌.金属器皿洗净后,用酒精棉球擦,灭菌. 灭菌方法: 物理方法:干热,湿热,过滤 化学方法:消毒剂,抗菌素 17 细胞冻存与复苏技术要点。 细胞冻存要点： 细胞分装入冻存管中。