3-基因克隆.pptVIP

IMAU, Huo XW 第三讲基因克隆Gene Clone For Graduate Students of Vegetable Crops Science Discipline 基因克隆 基因克隆所需的工具酶和载体 目的基因的制备与克隆 重组体的构建及向宿主细胞的导入 重组体的筛选与鉴定 基因工程载体及其构建 一 基因 1866年，孟德尔首次将控制性状的遗传因素称遗传因子。 1909年，Johanssen首次用gene代替遗传因子 1910年，摩尔根提出了遗传粒子理论，认为基因是一粒一粒的排列在染色体上。 1944年，Avery证实遗传物质是DNA。这样就把基因定位在了DNA上。 1953年，Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构模型，确定了基因就是DNA片段这一概念。 1955年，Benzer基于T4噬菌体的顺反互补实验，提出了顺反子的概念，从功能单位的意义上，顺反子实际上是基因的同义词。 20世纪60年代，法国的遗传学家提出基因是可分的理论。 20世纪70年代，对基因的认识进一步深化，发现了断裂基因、重叠基因和跳跃基因。 基因的概念：基因是含有特定遗传信息的核苷酸序列，它是遗传物质的最小功能单位。 Three Major Activities of Gene A gene is a repository of information. The sequence of bases in the RNA depends directly on the sequence of bases in the gene. Most of these RNAS, in return, serve as templates for making other critical cellular molecules, proteins. A gene can be replicated. This duplication is very faithful, so the genetic information can be passed essentially unchanged from generation to generation. A gene can accept occasional changes,or mutations. This allows organisms to evolve. 二 基因工程 基因工程的概念：对不同生物的遗传物质---基因，在体外进行剪切、组合、拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体（质粒、噬菌体、病毒）转入微生物、植物或动物细胞内。进行无性繁殖，并使所需要的基因在细胞中表达，产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。 三. 生物工程 基因工程：略。 细胞工程：包括细胞融合，细胞大规模培养，以及植物组织培养快速繁殖技术。 酶工程：就是在一定的生物反应器中，利用酶的催化作用将相应的原料转化成为所需物质的技术。 微生物发酵工程：利用微生物的特定性状，通过现代化的工程技术生产有用物质。 生化工程：包括生物反应器设计制造，传感器的研制以及产物的分离提取和精制技术。 基因工程的基本原理：　主体战略思想是外源基因的高效表达，可从四方面达到目的：　1、 利用载体DNA在受体细胞中独立于染色体DNA而自主复制的特性与载体分子重组，通过载体分子的扩增提高外源基因在受体细胞中的剂量，借此提高宏观表达水平。　2、 筛选、修饰重组基因表达的转录调控元件：启动子、增强子、上游调控序列、操作子、终止子。　3、修饰和构建蛋白质生物合成的翻译调控元件：序列、密码子。　4、工程菌（微型生物反应器）的稳定生产及增殖。 (二)植物基因工程的主要内容 目的基因的分离 载体构建: 启动子-目标基因-终止子（表达框架） 体外转化 转化植株及其植株再生 转基因检测体系。 PCR Southern Northern Western 转基因表型 转基因植株的筛选、繁殖 目的基因的概念 将那些已被或者准备要分离、改造、扩增或表达的特定基因或DNA片段，称为目的基因。 (三)植物基因的克隆 功能→基因（蛋白→核酸） 根据mRNA特异性分离目标基因（cDNA的合成和克隆） DNA插入突变分离目标基因 基于图谱的基因克隆方法 基因文库的构建 化学合成目的基因 一、基因文库的构建 基因组文库： 用适当的方法将某一种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片段，并将这些片段与适当的载体进行体外重组，再转入到相应的宿主细胞中繁殖和扩增，从而形成含有重组DNA分子的群体。简单的说，基因组DNA文库就是具有扩增能力的各种DNA片段的混合体。 构