第二章基因工程的工具酶预案.ppt

* 5.核糖核酸酶 H（RNase H） 降解DNA-RNA杂交分子中的RNA链，不降解单链核酸、dsDNA或dsRNA。 用于cDNA文库建立时除去RNA链以便第二条链cDNA链的合成 许多酶附带有该酶的活性，如AMV反转录酶。 * 6. 脱氧核糖核酸酶I (DNase I) DNase Ⅰ来源于牛胰，是内切核酸酶，可优先从嘧啶核苷酸的位置水解双链或单链 DNA 。酶浓度很低时，ds -DNA分子上将形成切口。 * 在Mg2+存在下，独立作用于每条DNA链，且切割位点随机。在Mn2+存在下，它可在两条链的大致同一位置切割 dsDNA，产生平端或1-2个核苷酸突出的DNA片段。 用途：制备RNA样品时除去DNA分子、切口移位，制备DNA探针 * 五、核酸末端修饰酶 1. 碱性磷酸酶 除去ss-DNA，ds-DNA 和RNA分子的5’-磷酸基团。避免不期望的链接。 细菌碱性磷酸酶（BAP） 牛小肠碱性磷酸酶（CIP）：CIP对热敏感 * 2. T4 多聚核苷酸磷酸激酶 催化ATP中的γ位的磷酸基转移到ss-DNA、ds-DNA和RNA分子的5’-OH上。 * 转移反应（I）：将 ATP的γ -磷酸基团转移到无磷酸的DNA 5 端，用于对缺乏 5-磷酸的 DNA 进行磷酸化 交换反应（II）：在过量 ATP 存在的情况下，该激酶可将磷酸化的 5 端磷酸转