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大肠杆菌菌落 专题二 微生物的培养与应用 课题一 微生物的实验室培养 一、基础知识 微生物: 1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到。 2.微生物包括五类 病 毒： 细 菌： 放线菌： 真 菌： 原生动物： 无细胞结构。 无细胞核的原核生物。 原核生物。能生产土霉素、 氯霉素等抗生素药物。 真核生物。如酵母菌 最原始的单细胞动物 如草履虫。 1.细菌的形态 球菌 杆菌 螺旋菌 细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图） 2.细菌的繁殖 3.细菌的菌落 ⑴、定义： 单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 ⑵、特征： 包括大小、形状、光泽度、颜色等。各种菌落的特征各部相同。 ⑶、功能： 每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。 几种菌落及其形态 （一）培养基 概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。P14 液体培养基：配制成液体状态的基质称为液体培养基。 分类 固体培养基：配制成固体状态的基质称为体培养基。 培养基的营养物质 （1） 一般都含有水、碳源、和氮 源、 无机盐等营养物质。 P14 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 P15 氢元素、氧元素 H2O定容至1000ml 无机盐 NaCl 碳源、氮源和维生素 蛋白胨 碳源、氮源、磷酸盐和维生素 牛肉膏 提供的主要营养 培养基组分 培养基的营养物质 （2）还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质 (例如生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素)以及氧气的要求。 P15 1.消毒 使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。P15 2、灭菌 对器皿、接种用具和培养基 ，使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。 （二）无菌技术（要求） 3、实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 4、避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 P15 常用的消毒方法 P15 1、煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法：用酒精消毒双手，氯气消毒水源等。 4、紫外线消毒等。 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160 ℃ -170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min。 常用的灭菌方法P16 三、实验操作(以培养大肠杆菌为例) ㈠、制备牛肉膏蛋白胨培养基 1、计算：计算100ml培养基时，各种成分的用量。 2、称量:准确地称取各种成分。 3、溶化：将牛肉膏及称量纸放入烧杯加水，加热 溶化后取出纸。 4、灭菌: 将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅灭菌，培养 皿用干热灭菌箱灭菌。 5、倒平板： 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒 平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 倒平板操作 P17 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？P17 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。又可避免培养基中的水分过快地挥发。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 ㈡、纯化大肠杆菌 平板划线法和稀释涂布平板法。P18 微生物接种的常用接种方法有： 1、平板划线的操作 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 2.稀释涂布平板的操作方法 P19 四、结果分析与评价 P20 1、未接种的培养基表面是否有菌落生长？ 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1-2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 2、在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到了独立菌落？ 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。