(中药注射剂生物活性试验的指导原则修改稿.docVIP

中药注射剂生物学活性测定的指导原则（讨论纲要） 中药注射剂具有成分复杂多变，活性成分和未知成分多，功能和主治面广，作用部位和作用靶点多等特点。为保障中药注射剂临床用药的有效性和质量可控性，在质量标准中理化分析的基础上增加与功能主治、主要药效相关的”生物学活性测定”项目,可进一步完善质量标准、提高药品质量。中药注射剂可参考本指导原进行设立”生物学活性测定”项方法学研究和适用性研究。 一．方法选择： 应选择与功能主治相关的1-2(或更多)种主要药效学动物模型作为生物学活性测定方法，方法力求设计合理、操作简便、指标明确、灵敏度高、重现性好，尽可能使用小动物，以限度试验为主。可用体内试验，也可用离体器官、血清、培养细胞、微生物等进行试验。 试验设计： 可采对照组和给药组进行比较、或给药前后比较的方法，用质反应或量反应指标进行统计学处理。小动物5～10只一组、也可根据试验要求用更少的动物。初试时可仅设阴性对照组和给药组比较，结果统计学处理如为阳性（差异显著）则符合要求。 结果评价： 如结果为阴性或可疑阳性（差异不显著），在复试中再增加动物数并增设阳性对照组，复试结果可单独评价，也可与初试结果合并统计计算综合评价,如阳性对照组结果阳性而供试品仍为阴性，则生物学活性测定结果”阴性”。鉴于中药注射剂成分及生物学活性测定方法的复杂性和变异性，在试行标准生物活性测定项目中可考虑采用2项以上生物活性测定方法，规定其中有1项阳性即为结果”阳性”而符合规定。 生物学活性测定方法内容： 内容一般包括试验设计、操作方法、供试品配制、给药限值剂量、阳性对照品、观察指标、结果评价（初试和复试） 二．剂量限值： 按临床用药剂量（平均公斤剂量）的30倍以下（一般20倍以下）计算最大给药剂量，以不同剂量静脉注射或其他注射途径，一次或多次给药，按观察指标观察量效反应关系，选择作用明显和确切的剂量作为剂量限值。限值一般应低于急性毒性试验的最小致死量（MLD）。 阳性对照： 限度检查中的阳性对照药主要用于检测方法的可靠性和结果的重现性而非生物活性的定量测定。为提高复试时阳性对照组反应结果的重现性,可选用含量和纯度高、具有确切类似药理作用的中药有效单体成分注射剂或化学药品注射剂作为阳性对照药，首选药理作用类似的中药注射剂。阳性对照药应经量效试验确定在各实验室间可重现的确切的剂量限度。 方法验证： 生物学活性测定要进行重复性、检出限、重现性的验证，考察生物检定方法与理化分析和功能主治的相关性，方法的可靠性。 重复性验证应在同实验室用符合理化分析质量标准的同一批供试品进行6次试验或2批不同来源供试品各进行3次试验。 检出限验证可采用多家企业的多批（6批以上）同种供试品进行测定。 重现性验证应在2个以上不同实验室进行同一批供试品试验。 验证用供试品理化分析必须符合质量标准规定。有条件时，应结合理化分析结果进行全面评价（如不同含量的供试品与生物学活性测定的相关性）。 生物学活性测定方法参考： 1．活血、化瘀、舒脉、通络─大鼠血小板聚集试验、血小板聚集试验(体外法)、小鼠耳廓微循环试验、大鼠动静脉短路血栓检定法 2．中风、脑缺血─小鼠脑循环障碍试验(颈总动脉结扎法)、小鼠脑缺血和体内血栓形成试验(胶原蛋白-肾上腺素法) 、小鼠耐缺氧试验 3．胸痹、心肌缺血─大鼠垂体后叶素致心肌缺血试验、小鼠耐缺氧试验(异丙基肾上腺素预处理法) 4．清热、镇痛一大鼠、家兔解热试验，小鼠扭体试验 5．祛风湿、抗炎一小鼠耳肿胀试验，大鼠角叉菜肿试验、大鼠酵母足肿试验（抗炎、解热） 6．厥脱症、抗休克一大鼠、家兔、猫失血性休克试验,小鼠、大鼠、家兔内毒素性休克，微循环障碍 7．解毒一体内外抑菌试验，小鼠碳末廓清试验等免疫增强试验 8．利胆、保肝一小鼠、大鼠急性肝功能损伤试验、大鼠利胆试验 9．子宫收缩一大鼠离体或在体子宫试验(用药液或动物血清) 10．平喘一离体豚鼠气管试验，小鼠、豚鼠过敏性止喘试验、小鼠扩瞳试验(适用于洋金花类中药) 六．中药注射液生物学活性测定举例： (一).心脑血管药物 例1：活血化瘀功能—大鼠血小板聚集功能试验： 取体重约200g~240g的大鼠，雌雄各半，随机分组,每组6~10只,设阴性对照组,阳性对照组,给药组。阴性对照组注射氯化钠注射液，阳性对照组注射磷酸川芎嗪注射液或双嘧达莫注射液、阿魏酸钠注射液，给药组注射限值剂量供试品，单次或多次注射给药。测定前夜停食不停水，末次给药后1小时，麻醉，腹主动脉取血，3.8%枸缘酸9︰1抗凝，1000rpm 离心5分钟制成富血小板血浆（PRP），2000rpm 离心10分钟制成贫血小板血浆（PPP），用血小板聚集测定仪比浊法测定血小板最大聚集率,每只大鼠取PRP 0.2ml置于比浊试管中,将0.2mlPPP置于另一对照测定管中校正