食品中细菌总数的测定自主实验设计方案(修改版)..docVIP

食品中菌落总数的测定自主实验设计方案 实验目的?? 1、学习并掌握细菌的分离和活菌计数的基本方法与原理。?? 2、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。 实验原理 菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 实验材料 营养琼脂培养基（10?g蛋白胨、3g牛肉膏、5gNaCl、琼脂15g）、?无菌生理盐水、酒精灯、电炉、灭菌箱、??无菌培养皿、移液枪?、?牛肉丸、火腿肠、灭菌玻璃瓶、恒温培养箱等等。 实验步骤 1．营养琼脂培养基配制? ?1.1称量? 按培养基配方比例（配制1000ml培养基，需加蒸馏水补足）依次用称量纸准确地称取10?g蛋白胨、3g牛肉膏、5gNaCl、琼脂15g。? 1.2溶解 用量筒量取一定量（约1/2）的蒸馏水倒入烧杯，在石棉网上加热并用玻棒搅匀，按配方顺序依次把药品加入（琼脂不要加）。待药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）。 1.3调pH 用5mol/L NaoH或5mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至pH达7.2-7.4。反之，用1mol／LHCl进行调节。 1.4融化琼脂 调好pH后，煮沸加入琼脂后，置电炉一面加热一面搅拌至琼脂完全融化才停止搅拌，用先预热的蒸馏水补足水分到1000ml。 1.5分装、包扎、标记 稍冷却后分装到锥形瓶，培养基体积约为锥形瓶体积的1/3。加塞棉塞，再包报纸。最后用标签纸标明培养基名称、组别等等。 1.6灭菌 121℃灭菌箱灭菌20min。 2?取样、稀释和培养?? 2.1?以无菌操作取检样25g（或ml），放于225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠），经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理1min，制成1:10的均匀稀释液。 2.2?用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1:100的稀释液。? 2.3?另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支10ml吸管。 2.4?根据食品卫生标准要求或对污染情况的估计，分别选择稀释度为10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的两种检样稀释液，用移液枪分别吸取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。? 2.5?稀释液移入平皿后，将凉至46℃±1℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基分别倾入加有1ml无菌生理盐水和不加任何溶液的灭菌培养皿内作阴性对照和空白对照。??（即共做22组培养皿） 2.6?待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养24±24h后，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。 3菌落计数方法?? 作平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平皿平均菌落数。到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不要超过24h。? 4菌落计数报告方法?? 4.1?平皿菌落数的选择?? 选取菌落数在30～300之间的平皿作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿平均数，其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平皿后乘以2以代表全皿菌落数。?? 4.2?稀释度的选择?? 1?)?应选取平均菌落数在30～300之间的稀释度报告? 2?)若有二个稀释度均在30～300之间时，应以二者比值决定，比值≤2取平均数，比值2则其较小数字? 3)?若所有稀释度均300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之? 4)若所有稀释度均30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之? 5)若所有稀释度均无菌落生长，则应按1乘以最低稀释倍数报告之? 6)若所有稀释度均不在30～300之间，有的300，有的又30，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之?3.4?菌落计数报告方法??