第六章 源目的基因表达与调控 2.pptVIP

第四节 目的基因表达产物检测与分离纯化 一、外源目的基因表达产物的检测 外源目的基因的表达包括转录和翻译两个阶段。外源基因表达产物的检测过程就是对特异性mRNA或蛋白质的检测。 特异性mRNA的检测: Northern杂交 特异性蛋白质的检测: ELISA, Western杂交 1.Northern 印迹杂交(Northern blot) 检测RNA（主要是mRNA）的方法 与Southern杂交的区别 靶核酸：RNA RNA电泳: 在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。 变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。 转膜：不需变性 ELISA原理 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性 结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关 ELISA可以分为直接法、间接法和夹心法等几种。 直接法： 直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗原—抗体复合物，加入酶反应底物，测定产物的吸光值，计算出