天然药物化学第四章全解.pptVIP

第四章 柱色谱分离技术 教学目标 1、理解吸附色谱和分配色谱的基本原理,掌握常用吸附剂的特点及适用范围. 2、掌握聚酰胺色谱，凝胶过滤色谱的原理、特点及应用。 3、掌握中药有效成分结构鉴定的一般方法。 4、掌握大孔树脂法的原理及应用。 20世纪初由俄国的植物学家Tswett创立。让从绿叶中提取出来的色素石油醚溶液，通过一根填满CaCO3的细长玻璃柱，然后用纯净的石油醚加以冲洗，结果在玻璃柱内的植物绿叶色素就被分离成几个具有不同颜色的谱带，然后按谱带颜色对混合物进行鉴定分析，称之为色谱。 色谱法是目前被广泛应用的分离纯化和鉴定化合物的一种有效方法。 优点：试料用量少，分离效率高。用一般分离方法无法分离的化合物，如天然产物中结构相似，性质相似的成分，色谱分离能获得很好的分离效果。已成为化学领域中一个重要的分离、分析工具。 色谱法的分类： 1、按固定相或支持剂的种类可分为氧化铝色谱；硅胶色谱；聚酰胺色谱；凝胶色谱等。 2、按移动相种类可分为气相色谱；液相色谱。 3、按操作方式可分为柱色谱；纸色谱；薄层色谱。 4、按分离原理可分为吸附色谱；分配色谱；离子交换色谱、凝胶色谱。 第一节 吸附柱层析 一、基本概念： 利用作为固定相的吸附剂对混合物中各种成分吸附力的大小不同，使各成分得到相互分离的方法。适用于分离中等分子量的脂溶性物质。 二、基本原理 化学吸附(不可逆) 半化学吸附(氢键,可逆) 物理吸附(可逆) （1）有较大表面积和足够的吸附力 （2）对不同化学组分有不同的吸附量，能较好的分离 （3）化学惰性，不与溶剂及样品中各组分起反应 （4）不溶于溶剂和洗脱剂 （5）颗粒均匀，有一定机械强度和细度 三、吸附剂 为硅氧烷交链结构： 氧化铝 180℃烘6个小时，含水3％ （1）酸性：适用于有机酸,不能分离碱性物质. （2）碱性：分离碳氢化合物、生物碱、甾族类化合物。不适合醛、酮、酯及有机酸的分离，可发生化学反应。 （3）中性：中性的、碱性、脂溶性化合物的分离。 聚酰胺： 由酰胺聚合而成的一类高分子化合物。尼龙，锦纶 形成氢键的能力受以下因素影响 溶剂的种类（聚酰胺在水中形成氢键的能力最强，在有机溶剂中较弱，在碱性溶液中最弱。 化合物分子结构 A：化合物分子中能形成氢键的基团数目越多，被聚酰胺吸附越强。 B：成键基团的位置不同，被聚酰胺吸附的强度也不同。 C：分子中芳香核、共轭双键多者被吸附强度小。 D：能形成分子内氢键者被吸附强度小. 活性炭： 属于非极性吸附剂,对极性物质的吸附力弱,对非极性物质的吸附力强. 粉末状(吸附力强,适合于极性大的化合物的分离) 颗粒状(吸附力居中,适合于极性不太大的化合物的分离) 锦纶活性碳(以锦纶为粘合剂,吸附力弱,适合极性小的化合物的分离) 活性炭的吸附规律 1、极性基团多时，在活性碳上的吸附力弱，反之则强。 2、在一定条件下，化合物母体结构较大时，吸附力强，反之则弱。 例如：对多糖的吸附力大于单糖；对多肽的吸附力大于氨基酸。 3、对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物。 4、对生物碱的吸附力，一般在碱性溶液中强，而在酸性溶液中弱（呈盐增大了极性）；相反，对于有机酸、酚类化合物的吸附力，则在酸性溶液中吸附力强，而在碱性中弱。 活性碳的预处理：该物质对空气有一定程度的吸附力，气体分子被活性碳吸附后占据了其吸附表面，使活性碳吸附活性下降，即中毒。 所以使用前需活化处理：在120~150℃的烘箱中烘2~6小时。 四：溶剂 选择何种溶剂为移动相对分离效果有极大的影响。 所用溶剂应具备纯度高、不含水份； 与试样、吸附剂不起化学反应； 对被分离成分有适当的溶解度； 黏度小； 易挥散。 对于极性吸附剂，若选择的流动相溶剂极性越大，则其展开或洗脱能力就越强；反之，则刚好相反；在选择时要考虑被分离的物质的性质。 五：被分离的物质 被分离物质、吸附剂、溶剂三者为组成吸附色谱必不可少的要素。 对于极性吸附剂，被分离物质的极性越大，被吸附越强，溶剂进行洗脱就越困难。 一般来说： 若被分离的物质极性大，可选用活度较低的吸附剂，而移动相的极性大； 若被分离的物质极性小，可选用活度较高的吸附剂，而移动相的极性小； 六、操作方式 装柱：所需的玻璃柱内径与柱长之比是1：15~1：20之间。 粒度在100目左右。分离试样与吸附剂用量比为1：30~1：60 注意上样体积不能太大。 上样 分为干法和湿法上样两种。 洗脱 适当控制流速 收集检查 第二节 分配柱层析 一、基本概念： 利用混合物中各成