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- 2017-01-29 发布于天津
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端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长的影响
端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长的影响
【关键词】 端粒酶; 肝癌; 反义寡核苷酸; 细胞凋亡
肿瘤细胞端粒酶RNA有11个核苷酸为端粒合成的模板,本研究利用反义寡核酸的靶向作用封闭端粒酶RNA模板序列,干预端粒合成,有望使永生化细胞的无限增殖受限。
1 材料与方法
1.1 材料 肝癌细胞株:SMMC7721,正常肝细胞株:L02,购自中科院上海细胞生物技术研究所;TRAP反应试剂( 宝灵曼公司产品); Beckman CS15R低温离心机,PerkimnElmer PCR仪,MK2酶标仪。
1.2 方法
1.2.1端粒酶硫代反义、正义及随机序列寡核苷酸由中科院上海细胞所合成与纯化,纯度为98%。序列如表1所示。表1 端粒酶模板区反义、正义及随机序列
寡核苷酸序列 位置1. ANTISENSE GTTAGGGTTAGACAAAAAAT56~362. SENSE TTTGTCTAACCCTAACTGAG45~653. CONTROLSCRAMBLED TTTGTCTAACCCTAACTGAG
1.2.2 合成寡核苷酸对肝癌细胞端粒酶活性的影响 1×106SMMC7721肝癌细胞培养于含10%热灭活小牛血清的1640培养液中(37℃、5% CO2)。正义、随机、反义寡核苷酸终
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