结核分枝杆菌mtb84dna疫苗构建及免疫保护研究.doc

结核分枝杆菌Mtb84DNA疫苗构建及免疫保护研究 关键词：结核分枝杆菌;DNA疫苗;分泌蛋白;细胞免疫;免疫保护 　　摘要:目的评价构建结核菌DNA疫苗pVS84免疫小鼠体外产生细胞因子的能力和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的效果。方法利用基因技术将结核菌Mtb8.4插入pVAXl载体，构建表达结核菌Mtb8.4蛋白（分泌型）的DNA疫苗pVS84。将雌性C57BL/6小鼠分成5组，每组20只，分别用pVS84、pVAXl、plL2S和PBS分别各免疫3次，每次均间隔2周，以等剂量加强免疫2次。另一组用BCG（105CFU）皮内注射免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强免疫后，无菌取脾培养，检测上清细胞因子。另10只鼠则用结核菌H37Rv经静脉攻击，2周后取脾、肝和肺培养结核菌并进行菌落计数。结果pVS84免疫组鼠脾淋巴细胞培养上清的mIL-2和mlFN-Y平均含量分别为（290.0±112.9）pg/ml和（501.7±79.4）pg/ml，显著高于3个阴性对照组（Plt;0.001），与BCG免疫组无显著性差异（Pgt;0.05）。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS84免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为（39176.9±3702.6）、（18780.1±2535.8）和（24410.3±1846.8）CFU/g，分别低于pVAXl、plL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量（Plt;0.001），仅脾结核菌载量显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS84能够刺激机体产生抗结核菌所需的Thl型免疫应答，免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力与BCG接近。 　　关键词:结核分枝杆菌;DNA疫苗;分泌蛋白;细胞免疫;免疫保护 　　ConstructionandprotectiveefficacyoftheTBDNAvaccineexpressingMycobacteriumtuberculosissecretoryMtb8.4protein. 　　　　Abstract:ObjectiveToevaluatethecapacityinproductionofcytokinesinvitroandtheprotectiveefficacyofthemiceimmu-nizedwiththeTBDNAvaccinepVS84weconstructed.MethodsPlasmidpVS84expressingsecretoryproteinofMycobacteriumtuberculosisMtb8.4wasconstructedbyinsertingmtb8.4intothevectorpVAX1.20femaleC57BL/6inbredmicein5groupsimmu-nizedwiththe100ugpVS84，pIL2S，pVAX1，PBSandBCG（105CFU）for3timeswith2weeksintervalsexceptBCG（onlyonevac-cinizationwithoutboost）.Seraandsupernatantsof10miceineachgroupweredeterminedforhIL-2，mIL-2，mIFN-γ，mIL-6andmIL-10bysandwichELISA.Theother10miceineachgroupwerechallengedwith106CFUsMtuberculosisH37RvandkilledforculturingH37Rvfromthespleens，lungsandlivers.ResultsTheaverageconcentrationsofmIL-2andmIFN-γinthesupe-matantsfrompVS84immunizedmicewere290.0+112.9pg/mLand501.7+79.4pg/mLrespectively，significantlyhigherthanthosefromthepVAX1，pIL2S，andPBSinjectedcontrols（Plt;0.001）.NosignificantlydifferencehasbeenobservedforthemiL-6andmiL-10concentrationsfromthemiceinall5groups.TheaverageMtuberculosisloadsinthespleens，liversandlungsinthepVS84immunizedgroupwere39176.9±3702