单克隆抗体制备技术..docVIP

单克隆抗体制备技术 杜双利 2012100071 生技基 摘要：单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具，其在基因和蛋白质的结构与功能研究方面有着不可或缺的作用。本文综述了单克隆抗体制备技术历史、现状、最新进展研究、应用等，并且还同时介绍了一些重要的制备技术，包括嵌合抗体、噬菌体展示技术、核糖体展示技术、基因工程抗体等。 关键字：单克隆抗体；制备技术；最新研究进展；现状与展望 The monoclonal antibody preparation technology Abstract:Monoclonal antibody technique, as an important tool in modern life science research, plays an indispensable role in the study of gene structure and protein function, as well as in the immunological diagnosis of humans, animals and plants. This review gives an overview on the monoclonal antibody preparation technology, about history, present situation, latest research, application etc.And also introduce some important preparation technology,such as chimeric antibody, phage display，ribosome display, genetically engineered antibody, etc. Key words: Monoclonal antibody；Preparation technique；Latest research；Situation and forecast 1、单克隆抗体制备技术的研究背景 1975年德国科学家Kohler 和英国科学家Milstein 利用杂交瘤技术将产生抗体的B 淋巴细胞同骨髓瘤细胞融合，成功的建立了单克隆抗体制备技术，由于单克隆抗体在生命科学领域的巨大贡献，此技术获得1984 年的诺贝尔医学和生理学奖；在1994年Winter 等创建了以噬菌体抗体库技术为代表的基因工程抗体，是单克隆抗体技术的又一重要进步，该技术是按人工设计所重新组装的新型抗体分子，使不经免疫既可获得任何一种动物（包括人）的特异性抗体成为可能，目前基因工程抗体在疾病的预防、诊断、及治疗方面已获得广泛应用。? 单克隆抗体的制备原理就是动物受到外界抗原刺激后可诱发免疫反应产生相应抗体。这一职能由B淋巴细胞承肿瘤细胞在体外培养条件下可以无限传代而为了制备大量纯一的单克隆抗体,Kohler和Milstein设计了如下方法小鼠骨髓瘤细胞与经绵羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞(B淋巴细胞)在聚二乙醇或灭活病毒的介导下融合。融合后杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性一方面可以分泌抗绵羊红细的抗体另一方面像肿瘤细胞一样可在体外培养条件下或移植到体内无限增殖从而分泌大量单克隆抗体。 2.1.1.1免疫动物 目前常用BALB /C 小鼠，也可用SC ID 小鼠( severe conbined immumdef iciemym ice)、转基因小鼠、转染色体小鼠，用特定的外来抗原一次或多次免疫动物, 刺B 淋巴细胞增殖形成浆细胞，分泌针对该抗原的抗体。 2.1. 1. 2 细胞融合 常用骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞融合, 通常采用PEG 法或PEG 电融合法, 该法稳定, 安全简单; 也有报道用小鼠的腘窝淋巴结细胞和骨髓瘤细胞融合, 5 周内成功产生抗病毒的小鼠单抗。抗体，即“单克隆抗体”。?细胞融合培养时加入HAT(H一次黄嘌呤、A一氨基喋呤、T-胸腺嘧啶)选择系统，目的是保证只有杂交瘤细胞的生长。融合细胞能在HAT选择性培养基上生长的原理是：在HAT系统中。A阻断了核酸合成的主要途径，这时正常细胞可以通过“补救途径”，由胸腺嘧啶激酶(TK)和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)利用T和H合成核酸。骨髓瘤细胞，因缺乏HGPRT不能利用“补救途径”，所以在HAT系统中不能存活。而骨髓瘤细胞和脾细胞的杂交细胞，从正常的脾细胞获得了HGPRT，能够存活。正常脾细胞没有在体外长期生长的能力。? 2. 1. 1. 3 杂交瘤细胞筛选 HAT选择培养基有3种关键成分: 次黄嘌呤( hypoxanth