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第三章 生物的结构和功能 3 .1 生物大分子的 物理结构测定 生物大分子的分子量都远大于10000。 生物大分子以各种方式参与活细胞中的许多反应，这些反应的进程和调控都有赖于它们的排布和结构。 知道生物大分子的大小、形状以及精细结构，对于了解它们的功能包括它们的反应过程，是非常重要的。 许多技术用于测定这些结构， 渗透压 对稀溶液，渗透压P遵从范特霍夫（Vant Hoff）关系 范特霍夫定律面临的挑战 对于大分子(如聚苯橡胶)，既是非稀的溶液，观测到的结果也偏离范特霍夫关系。产生的问题是： (1)如何测定不服从范特霍夫定律的分子的分子量？ (2)怎样基于渗透压数据来测定大分子的大小和形状？ 非电解质溶液的渗透压 1954年，Mc Millan Mayer证明，非电解质溶液的渗透压P可以表达为以克／立方厘米为单位的浓度C的幂级数： 相当稀的大分子溶液 对相当稀的大分子溶液，第三项和高次项都可以忽略不计，从而上式可以重新写作 光散射 瑞利(Rayleigh)用大小比入射光波长更小的各向同性微粒，建立了光散射理论。根据瑞利理论，在角度θ的散射光强度I，与距放射体积Rs处观测到的光强度Iq和入射光强度I0之间的关系是 大分子稀溶液的瑞利系数 当微粒的大小与波长相比，不是很小时，这一理论就变得更为复杂了，因为这时就要考虑在微粒不同部份散射光的干涉效应。在瑞利理论的推广中，德拜(Debye)于1947年证明，对于大分子的稀溶液，瑞利系数由下式给出 浓溶液的M值 对于更浓的溶液,下列关系式给出更准确的M值， 3.2 扩散 摩擦和粘度 当大分子一速度v通过一液体时，它们受到一摩擦力 斯托克斯(Stokes)定律 克分子体积只有对球状分子和椭球分子才可以确定；对球状分子，斯托克斯(Stokes)定律 扩散 为了确定 f，我们必须使分子通过一介质移动。这可利用扩散过程或通过沉降来达到，扩散过程中运动的驱动力由浓度梯度提供，沉降中的驱动力是重力或离心力。 扩散是分子无规运动的直接结果。 费克(Pick)定律 如果在容器中有一高浓度区，则纯无规运动将使分子超出这一区域而进入低浓度区。费克(Pick)定律指出，如 dn/dt 是每单位时间在一维通过截面A的分子数，则 扩散方程 两个容器，一个注满初始浓度C=C0 的溶液，另一个装满溶剂(C＝ 0)，它们可以移动，以便在时间 t＝0 使两者彼此接触。由于在这一实验中扩散分子的数量保持一定，所以，在界面 A 和长度 dx 的范围中浓度的增加就是扩散进入这一范围的过量物质。这导出扩散方程 扩散常数测量的实验装置 由这一实验确定的边界条件(对t＝0)是，对x＜0，c＝0；对x＞0, c＝c0。方程的解是概率积分 图给出了在不同 t 值，浓度(a)和浓度梯度(b)随 x 变化的情况。扩散在图所示的实验装置中将以光学方法来跟踪，扩散常数D将从概率积分表计算。 用激光技术测量扩散常数 光散射光谱学的发展已开始使用激光技术测量扩散常数。散射的(原初相干的)激光的线宽 Γ等于 用激光技术测量扩散常数的优点 通过测定在不同散射角放射激光的线宽 Γ，并用 Γ 对 |K|2 作图，就有可能直接和精确地确定D。 不再需要建立浓度梯度以开始扩散， 无须回避机械扰动、温度梯度以及分子或微粒上的电荷带来的复杂性。 3.3 沉降 引力 微粒或大分子的质量，通常是通过观测它们在重力、离心力这样的外力影响下的运动来测定。 在引力场中，微粒的热运动速度，由引力与流动介质阻滞微粒运动的摩擦力之间的平衡来决定。 引力是微粒的重量与因流动介质移动而产生的浮力之间的差，等于 mg-Vρ0g；这里，m是微粒的质量， V是其体积， ρ0是流动介质的密度。 微粒沉降的匀速度 由于V＝m／ρ，这里 ρ 是微粒的密度，所以引力可以写作 离心 离心技术可产生高达300,000 g的“引力场”，使这一方法足以适应致蛋白质这样的大分子以及较小分子的需要。 在这种情况下，式上中的 g 被 ω2r 替换，其中ω 是离心的角速度, r 是微粒与旋转中心问的距离, 微粒沉降的匀速度v为 沉降常数 对一定的溶剂中给定的分子种类，沉降常数 质量 m和分子量 M 当扩散常数已知时，我们可以用关系式 表3．2列出了一些分于在20oC的沉降常数、扩散常数、分子量和密度的倒数(或比容)。 沉降率和沉降平衡 分于的沉降率可以通过在分析离心机中转动分了的悬浮液(溶液)(图3．3)，并观测移动的界面来测定。利用大家熟知的施列仑(Schlierenr)光学这样的特殊光学装置，人们可以按浓度梯度记录界面。由此，就可以获得典型的施利仑图样的照片。 图3．4示出了从大肠杆菌(E. coli)核糖体制剂得到的这种照片。 离心机模式图