自身抗体的检测及应用讲解.ppt

自身抗体的检测及应用 自身抗体 【概念】 由各种原因造成的机体B细胞产生针 对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每 种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。 自身抗体的意义 自身免疫性疾病的诊断； 疾病活动性的判断； 疗效的观察及预后； 指导临床用药等； 进行不同疾病的鉴别诊断。 自身抗体的检测方法 (1) 间接免疫荧光法(IFT): 检测ANA的金标 准，具有很高的敏感性和特异性。 将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温育，如果样本是阳性的，特异性IgG、IgA和 IgM抗体与相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。 （2）免疫印记法：将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置，每一种抗原只对应一条条带，不会产生非特异性反应条带，结果灵敏度高、特异好，判断实验结果简单，每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确，阴性与阳性的结果明显，容易判断，条带显色与抗体滴度相关 。 （3）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免疫实验室的应用受到一定限制 。 自身抗体检测常用方法学 间接免疫荧光法：解决有与无的问题 免疫印迹法：解决有什么的问题 酶联免疫吸附试验：解决有多少的问题 * 抗核抗体（ANA） 【定义】 ANA是抗核酸和核蛋白抗体的总称，泛指抗各种细胞核成分的抗体。 【分类】 (1)抗核蛋白抗体 (2)抗DNA抗体(包括抗dsDNA和抗ssDNA) (3)抗可提取性核抗原(ENA)抗体 抗核抗体（ANA） 检测方法：间接免疫荧光法（检测总抗） 根据荧光显微镜下细胞的形态确定核型(颗粒型，均质型等)，用荧光强度判定抗体滴度(1:100，1:320，1:1000，1:3200等) 优点：敏感性高 缺点：操作复杂，对人员要求高，各实验室标准有差异 抗核抗体（ANA） 均质型 与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮 核膜型 与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者 抗核抗体（ANA） 核点型 与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体 核仁型 多见于系统性硬皮病 特异性抗体检测 检测除ANA以外其他项目。 其中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)和抗双链DNA抗体(抗dsDNA)是用间接免疫荧光法。 而其他特异性抗体(包括抗Sm抗体，抗着丝点抗体，抗SSA抗体等)均采用免疫印迹法。 抗ENA抗体谱 是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体 的总称，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗 SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核 小体抗体、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体, 抗dsDNA。 不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗 ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊 断和鉴别具有重要意义。 标志抗体 相关疾病 抗Sm抗体 系统性红斑狼疮（SLE） 抗dsDNA抗体 系统性红斑狼疮（SLE） 高滴度抗RNP抗体 混合性结缔组织病（MCTD） 抗SSA/SSB抗体 干燥综合征（SS） 抗着丝点抗体 进行性系统性硬化症局限型 抗Scl-70抗体 进行性系统性硬化症弥漫型 抗Jo-1抗体 多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM） 抗肾小球基底膜抗体（GBM） 肺出血肾炎综合征（Goodpasture） 抗平滑肌抗体（ASMA） Ⅰ型自身免疫性肝病 抗肝肾微粒体抗体（LKM-1） Ⅱ 型自身免疫性肝病 抗可溶性肝抗原抗体（SLA） Ⅲ 型自身免疫性肝病 抗线粒体抗体2型（AMA-2） 原发性胆汁性肝硬化（PBC） 抗角蛋白抗体（AKA） 类风湿性关节炎（RA） 欧蒙印迹法试剂盒用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、Jo-1、CENP B、dsDNA、核小体、组蛋白和核糖体P蛋白等14种不同抗原lgG类抗体。 自身抗体检测结果正确解读 检测方法局限性：假阳性，假阴性 临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期 临床表现阳性，实验室检查阴性 实验室检查阳性，临床表现阴性 “自相矛盾”的结果 ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性 A