实验2 酶切 片段回收和连.docVIP

酶切、片段回收与连接 黄华如 （生命科学学院，生技091，29号） 摘要：实验用bt2质粒和pet质粒做酶切材料，回收目的片段，经连接后，转入以氯化钙罚制备的大肠杆菌感受态细胞中，并让转化大肠杆菌在含有抗生素培养基上生长，最后用长出来的大肠杆菌做验证PCR。本次试验中，质粒经过双酶切后，可以清晰的看到目的条带，转化后的大肠杆菌也可以在含有抗生素培养基中长出来，但是最后的验证PCR验证在培养基上生长的是假阳性大肠杆菌。说明了实验中目的基因没有成功转入大肠杆菌。 关键词：重组；酶切；连接；转化；片段回收 基因文库的建立为重组DNA研究工作提供了方便的、有意义的基因构建基因文库的意义不只是使生物的遗传信息以稳定的重组体形式贮存起来，更重要的是它是分离克隆目的基因的主要途径。对于复杂的染色体DNA分子来说，单个基因所占比例十分微小，要想从庞大的基因组中将其分离出来，一般需要先进行扩增，所以需要构建基因文库。使用缓冲液或缓冲液制作琼脂糖凝胶，然对目的进行琼脂糖凝胶电泳。在紫外灯下切出含有目的琼脂糖凝胶用纸巾吸尽凝胶表面的液体。此时应注意尽量切除不含目的部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高回收率。胶块超过请使用多个进行回收否则严重影响收率。注）切胶时请注意不要将长时间暴露于紫外灯下，以防止损伤。 凝胶浓度 Buffer GM使用量 1.0% 3个凝胶体积量 1