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山楂叶片中总黄酮的提取及检测 1 前言 山楂系蔷薇科山楂属植物。山楂叶中含有芦丁、金丝桃昔、懈皮素、牡荆素等多种黄酮类化合物，药理及临床实验表明:山楂叶黄酮类化合物对心血管系统具有降压、降血脂、增加冠脉流量、改善心肌供血供氧等功效，对血压、高血脂冠心病及心绞痛等心血管疾病均具有良好疗效。此外，山楂叶黄酮类化合物有较高的抗氧化、抗自基活性，是生产天然保健食品较为理想的添加剂。我国各地均有山楂栽培，山楂叶资源丰富但尚未得到开发利用，故价格低廉。山楂叶中黄酮类化合物含量高达2% ,为果实含量的20-120倍。因此,从山楂叶中提取黄酮类化合物既可以充分发挥我国的资源优势，又可以提高山楂树的经济价值，并可进一步研制开发出多种保健食品，山楂叶有着广阔的发展前景。本文对山楂叶中黄酮类化合物的提取及测定方法进行了探索及研究，旨在为山楂叶的综合利用和开发提供参考。 2 实验原理 大多数黄酮类化合物分子中存在肉桂酰基和苯甲酰基组成的交叉共轭体系，其MeOH在200nm-400nm的区域内存在两个主要的紫外吸收带，紫外分光光度法依据黄酮自身结构的特点，不使用显色剂，直接在其特征吸收峰处对试样进行测定。提取黄酮类物质的方法主要有水提法，有机溶剂的提取法，相对于有机溶剂的提取，水提法的黄酮提取率较低，而有文献[1]可知丙酮的提取效果比乙醇、甲醇好，以70%丙酮提取最好。但是由于丙酮价格较贵且含有毒成分，生产上一般不用。乙醇的提取体积分数低于60% 时过滤出现困难，而且为了后续的过滤、回收溶剂、干燥等操作也比较容易,所以本实验以70%乙醇溶剂进行提取。 3 仪器与试剂 材料：山楂叶（65℃时烘干，粉碎，过60目筛） 仪器：紫外可见分光光度计（UV2550型紫外可见分光光度计）；分析天平（万分之一天平）； 索氏提取装置一套；减压蒸馏装置一套 100ml容量瓶2个；25ml容量瓶10个；吸量管（1ml、2ml、5ml） 试剂：芦丁（生化试剂）；无水乙醇（AR，天津化学试剂批发公司）；正丁醇（AR）；去离子水 4 实验内容 4.1 标准溶液的配制和标准系列的优化条件选择： 4.1.1 标准曲线的配制： 将芦丁标准品于120 ℃下干燥至恒重，准确称取芦丁对照品0.2000g，用30%（体积分数）的乙醇溶解定容于100ml的容量瓶中，得到浓度为2.000mg/ml的标准液。准确吸取芦丁标准液 0 ml、0.5 ml 、0.8ml、1.0ml、1.4ml、1.8ml于25ml的容量瓶中，并用30%的乙醇定容。 4.1.2 标准系列优化条件的选择： 用紫外可见分光光度计对芦丁对照品标准系列溶液在200nm—400nm的波长范围内进行扫描，观察芦丁对照品的标准系列的吸光度—波长曲线，选择最佳的吸收波长进行测定。选择好吸收波长后对标准系列进行测量，同时绘制吸光度—浓度曲线。 4.2 检出限的测定： 用30%的乙醇溶液进行12次平行测定，得到其测定的吸光度，由所得的A计算其标准偏差σ，同时对待测的样品溶液（其质量浓度为c）进行6次平行测定，得到吸光度的平均值A，那么检出限Dc: Dc= ·3σ 4.3 样品的前处理与样品溶液的配制： 4.3.1 样品的处理： 称取山楂叶粉末5.000g装入滤纸桶内，置于索氏提取器中，加入70%（体积分数）的乙醇100ml，在80℃下水浴回流进行萃取，待索氏提取器中的萃取液近无色时结束，趁热抽滤，滤渣用无水乙醇洗涤，合并上清液减压蒸馏浓缩至干（若溶液颜色太深可用正丁醇萃取脱色），回收溶剂。 4.3.2 样品溶液的配制： 用70%的乙醇溶解样品定容于100ml的容量瓶中，即为样品待测液。取待测样品液2ml于25ml的容量瓶中用30%的乙醇定容，摇匀即得样品液。 4.4 样品的测定及回收率实验： 4.4.1 样品的测定： 按照4.1.2的方法对样品液进行测量，同时测样品空白，得到样品液的吸光度。 4.4.2样品的稳定性检测： 每隔30min测一次样品的吸光度，观察其稳定性，从而找出测定的最佳时间。 4.4.3 回收率实验： 分别取5.0000的山楂叶粉末装入滤纸桶内，置于索氏提取器中，同时分别准确加入芦丁标准液2ml、4ml、5ml、6ml，按4.3的步骤进行处理，同时测吸光度。 5 数据的处理与结果计算： 5.1 标准系列优化条件的选择： 由标准系列不同浓度的紫外光谱图选定测定的最佳波长为： 5.2 标准曲线的绘制： 浓度mg/ml 0.0000 0.0400 0.0640 0.0800 0.1120 0.1440 吸光度