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如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准 关键词： 高质量荧光定量PCRcDNA标准2012-09-17 11:11 来源：天根生化 点击次数： 711 荧光定量PCR（Real-time PCR）是目前基因表达定量分析的重要检测手段，已经为越来越多的研究者所采用。“好的开始是成功的一半”，Perrez-Novo等(Perrez-Novo et al., 2005)曾报道获得高质量RNA对后续PCR定量结果的准确性是非常重要的，而高质量RNA是获得高质量cDNA的必要条件，所以本文着重介绍一下如何获得高质量cDNA。 高质量cDNA应具备以下几个特点：无基因组DNA残留、能准确反应出样本真实的转录情况和信息完整且浓度适当等特点。 高质量cDNA应保证无基因组DNA残留 在提取RNA的过程中，常常会有基因组DNA的残留，从而导致实验结果的不准确性或假阳性结果的出现。2008年，Nature Protocol的一篇关于荧光定量PCR实验研究的文章1中明确指出，在合成cDNA第一链之前应去除基因组DNA残留，以免cDNA中有基因组DNA的存在，影响高灵敏度的荧光定量PCR实验结果： 图1 那么，如何避免基因组DNA对荧光定量PCR结果的影响呢？对于真核生物，由于内含子的存在，可以选择跨内含子设计引物的方法来避免基因组DNA及假基因（Pseudogenes）