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2 、有机化合物分子结构的推测 紫外吸收光谱虽然不能对一种化合物作出准确鉴定，但对化合物中官能团和共轭体系的推测与确定却是非常有效的。一般有以下规律： （1）在220～280nm范围内无吸收，可推断化合物不含苯环、共轭双键、醛基、酮基、溴和碘（饱和脂肪族溴化物在220～210nm有吸收）。 （2）在210～250nm有强吸收，表示含有共轭双键，如在260～350nm有高强度吸收峰，则化合物含有3～5个共轭π键。 （3）在270～300nm区域内存在一个随溶剂极性增大而向短波方向移动的弱吸收带，表明有羟基存在。 （4）在250～300nm有中等强度吸收带且有一定的精细结构，则说明有苯环存在。 （5）若该有机物的吸收峰延伸至可见光区，则该有机物可能是长链共轭或稠环化合物。 紫外—可见吸收光谱也可以用来作同分异构体的判别。例如，下面两种化合物： （ Ⅰ） （Ⅱ） 用化学方法只能测出它们各含有两个羰基，但二者的紫外光谱却有很大差别。化合物（Ⅰ）在270nm处有最大吸收，吸收峰位置与丙酮相同而强度差不多是丙酮的两倍。化合物（Ⅱ）由于两个碳氧双键共轭，吸收峰出现在400nm左右。 采用紫外光谱法，还可以测定某些化合物的互变异构现象。例如，乙酰乙酸乙酯有酮式和烯醇式间的互变异构： 酮式没有共轭双键，它在204nm处仅有弱吸收；而烯醇式由于有共轭双键，因此在245nm处有强的K吸收带（κ=18000L·mol-1cm-1)。 在极性溶剂中，最大吸收波长λmax= 272nm(εmax= 16)，说明该峰由 n—π*跃迁引起，所以在极性溶剂中，该化合物应以酮式存在。相反，在非极性的正己烷中，出现λmax= 243nm的强峰，这说明在非极性溶剂中，形成了分子内氢键，故是以烯醇式为主。 2. 纯度检查 主要用于检查对光没有特征吸收的化合物中的具有特征吸收的杂质。 如要检定甲醇或乙醇中的杂质笨，可利用苯在256nm处有B吸收带，而甲醇或乙醇在此波长处没有吸收。 双波长或三波长核酸（DNA、RNA）的测定时，根据A260 / A280的比值可确定DNA或RNA的纯度。对于DNA，比值为1.6～1.8之间,RNA比值为1.8～2.0之间,认为纯度较高。 又如四氯化碳中有无二硫化碳杂质，只要观察在318nm处有无二硫化碳的吸收峰即可。 二、定量分析 （1）绝对法 基于朗伯-比尔定律A = ebC ，当某一物质在一定波长下e（吸收系数，可由已知浓度样品通过测量、计算求得）为一常数，比色皿的光程也是已知，也是一个常数，只要在吸收系数指定的波长处测定样品溶液的吸光度值(OD值)，然后由下式求得该样品溶液的浓度或含量： C = A / e b （2)标准对照法  在同样条件下，在选定的波长处，分别测定已知浓度标准溶液的吸光度值A标和样品溶液的吸光度值A样，然后由下式求得样品溶液的浓度或含量： C样 = A样 ? A标 ? C标 1. 单组分定量方法 3）标准曲线法（包括K因数法） 最常用的定量分析方法。即在一定波长（λmax）下测定某物质的标准系列溶液的吸光度作校正曲线，然后测定样品溶液的吸光度值，由校正曲线求得样品溶液的浓度或含量。 所配置的标准系列溶液的吸光度应在0.1?1.5Abs范围内，吸收测定的精密度可达0.5%。 注意：UV/Vis的最低检测浓度与吸收系数、仪器噪声、基线平直度、光谱带宽有关。而最高检测浓度则与吸收系数、仪器的杂散光、光谱带宽等有关，吸收系数与光谱带宽有关。杂散光越小，检测上限越高。 例如：芦丁含量测定 分别移取0.2000mg/mL标液0~5mL →25mL,样品3.0mg→25mL 2.多组分定量方法 ⑴若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。 ⑵若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。 测量依据——吸光度的加和性： A.两组分吸收光谱部分重叠 ：测A1