第三章细菌质.pptVIP

第三章 质粒的定义 第一节 质粒的检测 第二节 细菌质粒的种类 二．质粒的大小和数量 三、质粒复制的类型 五．质粒的不亲和群（incompatible group） 第三节 细菌质粒的复制 三.复合质粒的复制机制 第四节 质粒在遗传工程中的应用 二、质粒在遗传工程中的运用 三、遗传工程中的工具酶 * * * * 细菌质粒 （Plasmid） 是一种细胞质遗传因子，是细菌细胞内独立于染色体外的一种复制子，它在细胞分裂时能衡定的传给子代细胞，并能给细胞带来表型效应，但它的消失并不影响细胞的生存。 质粒 一．消除法（curing）——间接推测 二．直接观察法 （三）电镜直接观察 （一）氯化铯——溴化乙锭（CsCL—EB）密度梯度离 心（图3-1） （二）琼脂糖凝胶电脉 三．重新感染试验法——柯赫法则 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 a b c 1.蛋白质 3.质粒DNA 2.染色体DNA 4.RNA 图3-1 CsCI密度梯度示意图 细菌质粒种类繁多,目前主要根据其表型效应命名并划分为不同的类型,目前在大肠杆菌中发现的质粒类型主要有三种:即性质粒、抗性质粒和产大肠杆菌素质粒。 1．性质粒：具有促进细胞结合的表型效应。 2．Col质粒（又称大肠杆菌质粒）：可以产大肠杆菌素的大肠杆菌质粒。 一．细菌质粒种类的划分 3．抗性质粒：能对不同物质，其中包括抗生素、化学药物、重金属等物质表现出抗性的一大类质粒的统称。 4．降解质粒：这一类质粒能利用许多不容易为一般细菌分解的物质作为碳源供细菌生长。目前只在假单胞杆菌中发现。 5．Ti质粒（Tumor inducing），Ti质粒是一种寄生在根瘤农杆菌（Agradacterium tumefacxiens）中，并能感染植物（主要是双子叶）的茎形成寇瘿瘤的一种质粒。 7．共生固氮质粒：存在于不同根瘤菌中，并能相应的豆科植物进行共生固氮的一类质粒。 6．隐蔽质粒：目前还没有发现它表现出任何性状的质粒。 A．直接法：根据质粒分子量和质粒DNA的总量来测定 B．间接法： 1）使质粒处于不复制状态下，测定开始出现不含质粒的细菌所经历的分裂次数； 2．数量：测定质粒的数量是以拷贝数来表示，拷贝数的测定一般有两种方法： 1．大小：一般分子量在1-10×106d 的质粒，大于此分子量的为大质粒。 拷贝数= 质粒的DNA总量 质粒分子量 严谨型（strigent）质粒：它的复制除变自身的基因控制外，还要严格的受染色体的控制。 松驰型（relaxed）质粒：它的复制主要受自身基因的控制，受染色体控制影响极少。 四．质粒转移类型 （一）质粒的转移与供受体细菌的关系 （二）带动转移 2）利用质粒的某些表型效应来测定。 质粒产生不相溶性存在的两种假说： 1．两个质粒结构相同，复制能力相同，一个先进入细胞复制后产生阻遏物抑制了后一质粒的复制。 2．膜位点假说：两个质粒的复制位点相同，互相竞争同一位点而产生不相溶性 0 10 20 2 5 10 20 50 100 0 10 20 0 10 20 Km,AP AP,Sm Km,Sm A B C 繁殖代数 双重抗性细菌（%） 大肠杆菌质粒的不亲和性和亲和性现象 A.pSC101-Km和pSC101-AP的不亲和现象；B.ColE1-AP和ColE1-SmSu的不亲和现象；C. pSC101-Km和ColE1-SmSu的亲和现象。 Km:卡那霉素； Ap:氨苄西林； Sm:链霉素； Su:磺胺。 以大肠杆菌的F质粒为例，证明严谨型质粒的复制既受寄主染色体的控制又受质粒自身的控制（图3-2） 二．复合复制子的复制 1．质粒与染色体合并后的复合复制子 1）整合后，质粒随（受）染色体控制 2）整合后，染色体的复制受质粒控制 一．严谨型质粒的复制特点 F-lac . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 涂布 Lac- 300C培养 影印 影印 300C培养 EMB培养 420C培养 EMB培养 300C 红 白 Fts-lac+ (质粒的复制呈敏感突变） 将Fts-lac引入一个非温度敏感的宿主 丫啶消除Fts-lac质粒 Lac- Fts-lac+ 42 ℃ 白 （质粒本身性质） 42 ℃ 红（染色体结构控制了F的复制） 引进一个野生型的F-lac+ Lac