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补体结合试验操作规程 试剂：稀释液（0.85%生理盐水）、补体、溶血素、抗原（由生物制品厂或所提供）、阴阳性血清、2.5%绵羊红细胞悬液、受检血清。（共七种） 材料准备： 1、稀释液（0.85%生理盐水）的配制：8.5g氯化钠加蒸馏水至1000ml。 2、绵羊红细胞悬液的配制：由健康成年公绵羊颈静脉采血，流入灭菌含玻璃珠的玻璃瓶内，混摇15—20分钟，脱除纤维，使其失去凝固性。将脱纤血移入离心沉淀管中，加2-3倍量的生理盐水混匀，以每分2000转的速度离心沉淀10分钟，使红血球下沉，吸弃上清液，再加生理盐水用玻棒搅匀再离心沉淀，反复三次，直至上清液透明为止，最后吸弃上清液，所剩沉淀即为红细胞。 按每2.5毫升的沉淀红血球加入到97.5毫升生理盐水中的比例制备，便为2.5%绵羊红细胞悬液。此液配制后在5—100C下，24小时内可应用。若发现有溶血时，需重新配制。经常做补体结合试验，就迫切需要能将红血球保存。方法是：将无菌的脱纤维蛋白的绵羊血与无菌的等量的改良的阿尔塞维尔氏液混合于三角瓶中（用三角瓶有利于扩大血球与空气的接触面积），置冰箱中冷藏可保存达两个月。需用时将血球离心洗涤后即可应用。 改良的阿尔塞维尔氏液配法：葡萄糖24.60克，氯化钠5.04克，柠檬酸钠（含2分子的结晶水）9.6克，蒸馏水1200毫升，10磅10-15分钟高压消毒后保存。 抗原、标准阳性血清、阴性血清、溶血素、补体、由制标单位提供，按说明书使用。 受检血清的收集和处理：以常规方法采血和分离血清，若发现血清混浊或有血细胞混在时，离心沉淀，每分1000转后将上清液分离出来，然后用稀释液将血清作1∶10稀释，按下表规定的水浴灭能。 各种被检动物血清的灭能温度和时间 血清类型 灭能温度（℃） 灭能时间/min 羊 58-59 30 马 58-59 30 驴、骡 63-64 30 黄牛、水牛、猪 56-57 30 鹿、骆驼 54 30 兔 63（有书说为56） 30 豚鼠 57-58 30 人 56-58 30 狗 63 30 操作方法：1.将1∶10稀释经灭能的受检血清加入2支三分管内，每管0.5ml。 2.其中一管加工作量抗原0.5ml，另一管加稀释液0.5ml。 3.上述2管均加工作量补体，每管0.5ml，震荡摇匀。 4.置37℃~38℃水浴20分钟，取出放于室温（22℃~25℃）。 5.每管各加2单位的溶血素0.5ml，和2.5%红细胞悬液0.5ml，充分震荡摇匀。 6.再置37℃~38℃水浴20分钟，之后取出立即进行第一次判定。 7.每次试验需设阳性血清、阴性血清、抗原、溶血素和补体对照。 被检血清和对照血清均应灭能，要注意的是各材料（特别是补体），从预备试验到正式试验，所用的溶血素、血球、补体、抗原、已知阳性血清及已知阴性血清，都必须是同一批，决不能中途更换另一批，所用补体如为新鲜的豚鼠血清，则从预备试验到正式试验必须在24小时内做完，以免补体失效。主试验各要素添加量和顺序如下表： 布鲁氏菌病补体结合试验 被检血清1：10 阳性血清对照 阴性血清对照 其他对照管 补体对照 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 0.5单位 1单位 2单位 110血清 0.5 0.5 5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 抗原 0.5 0 0 0.5 0 0 0.5 0 0 0 1.0 1.0 0 0 0 0.5 0.5 0.5 补体 0.5 0.5 0 0.5 0.5 0 0.5 0.5 0.0 0.5 0.5 0 1.0 0 0 0.125 0.25 0.5 生理盐水 0 0.5 1 0 0.5 1.0 0 0.5 1.0 1.0 0 0.5 0.5 1.5 1.0 0.875 0.75 0.5 置37℃水浴中30分钟 溶血素 0.5 0.5 0 0.5 0.5 0 0.5 0.5 0 0.5 0.5 0 0 0 1.0 0.5 0.5 0.5 绵羊红血球 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 生理盐水 0 0 0.5 0 0 0.5 0 0 0.5 0 0 0.5 0.5 0.5 0 0 0 0 置37℃水浴中30分钟 各对照管应有结果 　 看试验结果 —　 ++++　 ++++ — ++++ — — ++++ — — ++++ ++++ ++++