第23讲 氧化应激损伤的生物化学诊断.pptVIP

2．·OH的产生 3．吞噬细胞中活性氧的产生 H2O2除可生成·OH外，在Cl－存在时，经髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的作用，生成活性很强的次氯酸(HOCl)和1O2，1O2是一个强的亲电子性的氧化剂。 4．脂质过氧化作用 (lipid peroxidation) 在过氧化条件下，脂过氧化物 LOOH是不稳定的，能分解成一系列复杂产物。通常以小分子降解产物的数量来表示脂质过氧化的程度。 氨基酸的氧化脱氨作用需自由基的参与； 核糖核苷的还原过程需自由基的参与。 自由基参与一系列的连锁反应，能引起细胞生物膜上的脂质过氧化，引起细胞损伤。其机制比较复杂，主要有三方面： 膜脂改变导致膜功能的障碍和膜酶的损伤； 脂质过氧化过程中生成的活性氧对酶和其他成分的损伤； LOOH的分解产物特别是醛类产物对细胞及其成分的毒性作用。 (一) 氧化应激对脂类和细胞膜的破坏 膜内不饱和脂肪酸减少； 膜结构遭到破坏，使其流动性、通透性、离子转运及屏障功能受损； 溶酶体酶释放，线粒粒膨胀、酶失活等损伤； 红细胞膜破裂导致溶血； LOOH进一步分解产生醛类，尤其是丙二醛(MDA)可作为交联剂导致分子间的交联聚合。 (二) 氧化应激对蛋白质和酶的损害 直接作用于蛋白质（Pr） ，与最邻近的氨基酸（AA）发生Pr过氧化； 通过LOOH间接作用于Pr，使多肽链断裂或与个别AA发生氧化或使Pr交联，从而使Pr的结构发生变化，导致细胞功能紊乱。 (三) 氧化应激对核酸和染色体的损害 使DNA链断裂或碱基破坏、缺失，使核酸分子的完整性和构型受到破坏，造成遗传信息改变； (四) 氧化应激对糖分子的损害 使核糖、脱氧核糖形成脱氢自由基，从而造成DNA主链断裂或碱基破坏； 使细胞膜中的糖分子羟基化，破坏细胞膜上的多糖结构，影响细胞功能的发挥； 通过氧化降解使多糖破坏，影响组织功能。 　　如醛酮还原酶，可催化脂肪醛和脂肪醛-谷胱甘肽加成物的还原，以清除脂质过氧化作用的毒性产物。 脂溶性抗氧化剂 水溶性小分子抗氧化剂 蛋白性抗氧化剂 2. 二甲亚砜及甘露醇 　两者均有清除·OH的作用。二甲亚砜近来已用于抗脑水肿。 自由基和LOOH可引起血管内皮细胞(EC)肿胀和破损，导致动脉硬化发生。 LDL受到自由基作用，形成过氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)，大量沉积于EC，最终形成AS。 Ox-LDL可导致血小板聚集，促使自由基大量产生，从而加速AS发展。 近年研究进展： AS的发生与·OH和次氯酸致的蛋白氧化修饰存在相关性 AS病灶中EC、平滑肌细胞(SMC)及单核细胞的SiS基因表达↑↑ 氧化应激刺激血管SMC的增殖，参与了原癌基因的激活及异常表达 (二) 氧化应激与心肌缺血再灌注损伤 氧化应激致癌与促癌机制： 1. 氧化应激对DNA的作用 2. 氧化应激对蛋白质的作用 3. 氧化应激对脂质的作用 4. 基因损伤与致癌、促癌的关系 1. 氧化应激对DNA的作用 电离辐射可直接作用于DNA，产生自由基； 电离辐射也可间接产生羟基DNA自由基； 在有氧条件下DNA自由基与氧作用成为过氧由基； 这些自由基是造成DNA链断裂的原因。 3. 氧化应激对脂质的作用 氧化应激不但可通过生物膜中的PUFA的过氧化引起细胞损伤，而且还可通过LOOH的分解产物引起细胞的损伤。 它是生物体随着增龄而发生的退行性变化的总和，表现为机体功能活动的进行性下降，机体维持内环境恒定和对环境的适应能力逐渐降低。 1956年 Harman的衰老的自由基学说： 体内过量的自由基及其所诱导的氧化反应长期使细胞受到损害，导致人体衰老和死亡。 1978年Zs-Nagy提出的衰老膜学说(the membrane hypothesis of aging, MHA) 氧化应激诱导脂质和蛋白质交联以及质膜上所产生的残热可引起胞膜物理-化学特性的改变，且这种改变是通过随着年龄的增长而变化，从而使整个细胞产生退行性变化。 1972年Harman又提出线粒体衰老概念 20世纪80年代Miquel和Fleming提出了“衰老的氧自由基－线粒体损伤”的二阶段学说 1990年Bandy等阐明线粒体DNA突变可增加线粒体内氧应激水平由此引发衰老的出现 1992年Wallace等提出氧化磷酸水平下降与衰老和退行性病变，如阿尔茨海默氏病(AD, 亦称早老性痴呆)与帕金森病等有关。 (二) ·OH检测 (三) H2O2的检测 NBT还原法 高铁细胞色素C还原法 羟胺氧化法较为常用 具有设备简