转基因产品检测技术及其进展要点分析.ppt

转基因产品检测技术及其进展 用于RR大豆 和Bt 玉米ELISA检测 Lateral Flow Strip Protocol Tests for CryI(Ab) CP4 EPSPS Plant seeds More coming soon 目前应用方法的比较 定量PCR方法的关键参数 特异性 Specificity 灵敏度 Sensitivity 准确度 Accuracy 重复性 Repeatability 重演性 Reproducibility 特异性与灵敏度 只能在含有靶序列的转基因产品中检测出阳性信号! 需要测试不同植物品种 需要测试不同的转基因植物 足够低的检测灵敏度，满足转基因标识的要求 检测极限（LOD） 定量极限（LOQ） 正 确 度 重 复 性 在实验室内部不同重复下的精度 同样的方法 定量PCR方法可接受和应用基本要求 优点： （1）高度的通用性，几乎可以用于任何型号的定量PCR仪和任何目标DNA序列的扩增。 （2）无需另外设计荧光探针，无需特别优化条件，简便易行，成本较低。 （3）PCR反应后可以进行融解曲线分析，分析反应的特异性和目标序列的突变等。 优点： （1） 为杂交型探针，自身不被降解，其荧光信号是可逆的，PCR反应后可以进行融解曲线分析，突变分析，SNP基因分型以及产物鉴别 。 （2）包含两条探针，具备很高的目标序列特异性，不受引物二聚体和非特异扩增的影响。 缺点： 由于需要合成两条探针，探针的末端要封闭以避免延伸反应，所以合成的成本会比较高，也比较麻烦 。 优点： （1）具备目标序列特异性，良好的稳定性和灵敏度。 （2）有多种不同波长的荧光基团对可供选择，可以实现在同一管内检测Multiplex PCR ，降低成本也提高效率和准确性。 （3）探针自身对PCR反应的影响较小，定量的准确性高。 TaqMan MGB 针对Taqman探针荧光淬灭不彻底的问题，2000年美国ABI公司推出 了一种新TaqMan探针 ,即TaqMan MGB，其工作原理与TaqMan 探针相 同。 TaqMan MGB优点 优点: （1）本底信号低，特异性和灵敏度高 （2）为杂交型探针，可以用于融解曲线分析。 缺点: (1)杂交时探针不能完全与模板结合，因此稳定性较差。 (2)探针合成时标记较复杂。 分子信标是转基因定量检测的常用的技术，它还可以用于突变检测，SNP检测，在其基础上发展的技术有Amplifluor、Sunrise、Amplisensor、Scorpion 等。 目前常用的序列特异性探针比较 优点： 1 它是引物特异性探针，不需要引物以外的探针，节约成本，反应体系优化更加方便。 2 它是积累性荧光，信号不可逆，可用于融解曲线分析。 3 其探针序列是通用的，可用于检测任何目标序列，更节约成本。 缺点： （1）对引物的扩增效率影响比较大，影响定量的准确性。 （2）其稳定性不太好，其茎环结构对其标记染料的淬灭能力有限，容易出现淬灭不彻底，导致本底信号强。 该技术是在分子信标的基础上发展而来的技术，具备了分析信标的一般特点。 LUX 探针 通用模板（Universal Template, UT） 探针 优点 （1） 该探针的序列是通用的，可用于任何目标序列的特异性检测，兼具通用性和高度的特异性 （2）探针设计简单，使用方便，成本相对较低 缺点 （1）由于探针杂交在引物上，特异性取决于引物特异性 （2）与TaqMan相似，存在淬灭不彻底，本底信号偏高的问题 （3）探针位于扩增片段末端，对于Taq酶外切酶活性要求较高 AUDP探针（attached universal duplex probes） 优点： DNA聚合酶要求较低 长片段DNA序列分析能力强 通用性强 检测费用低 荧光信号荧光信号强度高而且稳定 缺点： 需要合成两条引物，原理复杂； 荧光信号产生比较晚。 什么是基因芯片技术？ 简单的概括就是将大量探针分子固定于支持物上，根据碱基互补配对原理，与标记的样品分子进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布进而获取样品中靶分子的数量和序列信息。 基因芯片的基本原理？ 基因芯片的工作原理与经典的核酸分子杂交方法(southern、northern)一致，应用已知的核酸序列作为探针与互补的靶序列杂交，通过随后的信号检测进行定性与定量分析。 低密度芯片 探针数量一般在几十或者几百个之间。主要用于少数目的基因和序列检测及确认。根据