基因克隆载课件.docVIP

I 逆境胁迫因子主要有干旱、盐渍、低温、水涝等，是限制植物生长和区域分 布以及影响农作物产量和质量的重要因素。植物对这些逆境胁迫的适应主要被转 录因子和调节基因（诸如控制多重抵御的酶、蛋白等）所介导。现有研究证明， 与转录因子活力有关联的是转录辅激活子，它能增强转录因子和顺式作用元件的 结合。MBF1是一个转录辅激活子，通过一个激活物和一个TATA盒结合蛋白的桥 连作用来调节转录激活。MBF1基因最早是在蚕、果蝇等动物体中被发现，后来在 植物中也发现了MBF1基因。据报道，在拟南芥中的MBF1基因的超表达能增强 其抵抗逆境胁迫的能力，而在番茄中关于此基因还没有相关的报道，本论文拟通 过在番茄中超表达MBF1基因研究其对逆境胁迫的抗性能力，从而明确MBF1基 因的分子作用机制，主要研究内容及结果如下： 1.番茄MBF1基因的克隆 以AC++番茄果实的总RNA为模板，体外反转录合成cDNA，以cDNA为模 板，通过PCR扩增得到得632bp大小的片段，将其命名为LeMBF1，并登录NCBI GenBank，登录号为EF051474。将其与拟南芥中的MBF1基因进行同源性比较， 在DNA水平上的序列相似性为56%，在氨基酸水平上的序列相似性为82%，是一 个新基因。 2.Northern杂交技术分析番茄LeMBF1基因的表达特性 克隆番茄MBF1（LeMBF1）基因特异片段，以此作为探针