cDNA基因芯片和反义核柑酸技术筛选及证实GTD发病相关基因.docVIP

浙江大学 博士学位论文 cDNA基因芯片和反义核柑酸技术筛选及证实GTD发病相关基因 姓名：崔金全 申请学位级别：博士 专业：妇产科（妇科肿瘤） 指导教师：石一复  新汪大学博士生学位论文 ??基因芯片和反义核苷酸 浙江大学医学院 ??春季博士生 导师 妇产科?究浦琢? 崔金全 石一复教授 与妊娠相关的疾病谱，目前为止确切的发病机制仍不清。从正常妊娠到葡萄胎， 葡萄胎再恶变为侵蚀性葡萄胎，然后继续发展为绒癌的整个过程类似于一个上皮 性肿瘤的癌变过程。具有大多数肿瘤无限增殖和转化及多阶段性发展的特征，并 不是某一个或某几个基因异常所引起。 基因芯片技术是伴随着人类基因组计划实旅而出现的新的基因分析技术。具 有大规模和高通量的特点，是当前功能基因组学重要研究手段，它明显优于过去 的单一基因研究模式，可以在整体的、基因组的水平对基因表达调控的网络机制， 进行系统、全面地分析。 反义核酸技术是一种以应用反义核酸类药物来抑制特定基因表达为目的的 基因治疗技术。反义核酸可以作为研究工具，用于对一些特定蛋白和基因的生理 功能的研究。为我们特异性降调细胞内基因表达提供一重要方法。 为确定在??⒉≈械闹匾O喙鼗?颍?颐鞘紫壤?肈?芯片技术，初 步确定在葡萄胎和绒毛癌细胞中不同表达的基因；然后，利用传统的???、 免疫印迹、免疫组化方法，对基因芯片检测结果正确性和可靠性进行分析。最后， 利用反义核苷酸技术，对肿瘤生物学行为有重要影响的基因进行绒癌细胞体外反 义寡核苷酸干预实验，快速确定新的治疗靶向。 第一部分葡萄胎和绒毛膜癌发病相关基因筛选 方法： 和???Ｈ廾?霸??嘌?脑缭腥廾?萄?赴?腿薨㎎?细胞株滋养细胞进 行基因差异表达谱分析。 ??％。与正常绒毛相比，葡萄胎中?条基因表达显著增高?系?，?条基因 条基因上调。葡萄胎和绒癌细胞中共同下调基因有?条，共同上调的有?条。 抑制细胞生长的基因在葡萄胎和绒癌中下调，而与细胞增生、恶性转化、转移等  新江大学博士生学位论文 有关的基因上调。 第二部分芯片结果验证及滋养细胞增生机制探讨 结果：????一?赴?⑵咸烟プ橹疪??????和蛋白水平显著高于 的表达显著高于正常绒毛和正常原代滋养细胞。??? 细胞、葡萄胎组织表达增加。 ?、??表达显著高于葡萄胎，葡萄胎恶变者 ??、??????????泶锵灾?哂谧匀换指凑撸??朴跋霻?、??、 ?表达，期别增加??、?????泶镌銮浚琖?预后评分越高 ??? ?表达越强，??与??? 显著正相关。 第三部分??反义寡核苷酸对人绒毛膜癌细胞株体外生长影响 方法：以脂质体????????为载体，将人工合成的分别位于???? 核苷酸序列?????嗦肭?和???????朔潜嗦肭?位点且全程硫代修饰的 两条反义寡核苷酸????? ??????????，???片断导入绒毛膜癌 对??蛋白和??表达的影响。 结果：??编码区的???????粤啃Ш褪毙?问较灾?种艼?细胞 增殖，以时效形式降调??的表达。??朔潜嗦肭鳤??????对细胞 增殖及??表达无明显的影响，但与???联合应用，对细胞的生长抑制 作用和对??表达的影响显著加强。???作用??，??表达水平开始 下降；作用???赴鸕??泶锖蜕?は灾?种疲??细胞生长和??表达 结论 胰酶消化法是获得正常高纯度早孕绒毛滋养细胞的快速有效方法。 表达谱基因芯片是一种快速、高效筛选滋养细胞疾病发病相关基因的方法。 ??、?????????????贕?中存在过度表达。 的因素。 细胞周期蛋白?及复制因子?母弑泶铮?得鱃?存在细胞周期检查点  新江大学博士生学位论文 制。 ??反义寡核苷酸通过特异性降调??蛋白和??的表达，抑制绒 毛膜癌??赴?纳?ぁＡ:嫌τ谜攵訰???虿煌?坏愕腁??是 提高反义药物有效性的重要方法之一。 ? ?联合应用基因芯片技术和反义寡核苷酸技术能够有效的筛选滋养细胞疾病 发病相关基因，并快速确定治疗靶向 妊娠滋养细胞疾病：基因芯片；反义核苷酸技术；滋养细胞增生  ????? ?????? ??????? ?? ???? ????? ?????? ????? ????? ???? ???? ????????? ?????：??闙? ???? ???? ?????????? ????? ????，???? ???， ?? ???甌? ?????? ? ???? ? ??? ? ? ???? ???． ??????．?? ???甌???? ??? ? ? ? ??? ????? ????? ??????? ?? ???．? ? ? ?? ????? ?? ????????? ????? ???． ? ? ?? ????? ?? ?? ?? ???????