pHBcΔ-HBsa决定簇嵌合质粒的构建、表达及免疫效果的初步评价.docVIP

华中科技大学 硕士学位论文 pHBcΔ-HBs“a”决定簇嵌合质粒的构建、表达及免疫效果的初 步评价 姓名：李磊 申请学位级别：硕士 专业：传染病学 指导教师：杨东亮  硕士学位论文 表达及免疫效果的初步评价 硕士研究生：李磊 导师：杨东亮教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室 中文摘要 目的本课题旨在利用乙肝病毒核心颗粒可以作为类病毒颗粒载体的特点，将 编码序列，将含此嵌合基因的质粒作为免疫原，以提高机体的特异性免疫应答水平， 有效的慢性乙肝治疗性疫苗提供实验依据。 方法 我们应用??际酰?直鹄┰霰嗦胍腋尾《綡术??????部分、 ????糠趾虷?? 次在体外连接后定向克隆到真核表达载体???的多克隆位点内。将嵌合基因亚 克隆到原核表达载体???瓸内，??诱导表达，利用镍离子亲合层析纯化融合 蛋白，并通过???蛍?????方法检测融合蛋白的抗原性。将真核表达质粒 清中特异性抗体并进行淋巴细胞增殖实验以评价免疫的体液和细胞应答效果。 结果 ??ü齈?、酶切和核苷酸测序表明：成功地构建了以??耍琭?颗粒作为类病毒 颗粒载体，在其?～?位氨基酸之间插入编码???癮”决定簇序列的原核和真 核表达质粒。 合蛋白是以包涵体?爸匚镏省?的形式存在：并通过镍离子亲合层析获得了高纯 度的融合蛋白。经???皐??? 物分布于胞浆内并具有良好的???乖?院鸵欢ǖ腍??抗原性。  华中科技大学同济医学院 ??逗现柿Ｃ庖吆蠓⑾终攵訦??的体液应答低于非嵌合质粒免疫组，但针剥 ???南赴?Υ鹑疵飨栽銮浚??倍訦??未引起明显的体液应答却获得了 特异性增殖反应。 结论 要全面客观地评价该基因疫苗的免疫效果还需要进行大量的重复试验以确证前 本课题的创新点 表达系统中表达，且表达产物具有一定的???虷??抗原性。 ??状斡没?蛎庖叩姆椒ㄆ兰哿饲逗匣?蛟贐??痗小鼠体内的免疫效果。证明了 嵌合基因可以诱导产生具有保护效价的?????灰?鸾锨康腍??应答。 同时获得了较强的???虷??特异性的细胞应答。 本研究的意义 特异性的细胞应答。因而有望用于提高机体的特异性免疫应答水平，打破机体对 实验基础。 关键词乙型肝炎病毒基因免疫治疗性疫苗嵌合基因融合蛋白  华中科技大学同济医学院 ?????? ? ???? ???狧?“?眃??‘??? ????? ?????? ? ??? ?????：?? ?? ???? ?????，??????? ? ????????? ????? ???? ??? ? ??籦?? ? ? ???? ???? ?????，??? ? ? ??? ??? ? ?? ? ?? ???? ??????? ? ? ?? ??? ??? ??? ??? ??．? ?? ? ????? ? ?? ? ??? ???? ? ?? ? ????? ????，? ??? ?? ???? ?????籋?? ?? ??????，?? ???? ?? ????? ? ? ??瑃? ???? ?甐? ?? ? ??? ?? ?? ? ??? ????? ?? ? ??? ??? ??? ? ???? ? ? ?? ? ? ??一???????．?? ???? ?????? ? ???? ???????? ?? ??．??????? ?? ???? ?????? ???? ???? ????? ?? ?? ? ????? ???? ? ?????．? ??，? ??? ??? ?? ??? ? ???? ????甌? ?? ?? ? ????? ????? ???? ???? ???? ?甌? ?????? ?????? ????????? ??△一??癮，’?????? ??? ? ?  华中科技大学州济医学院 硕士学位论文 ?甌? ??? ? ? ? ?? ?? ?? ????”? ??? ? ???? ??? ???? ? ? ???? ?????? ?? ???? ?? ? ? ?? ?瓵???? ? ???甌? ????? ?????? ? ? ? ?? ?????? ???． ?甴???? ?? ?? ???? ????? ? ?? ? ? ???琤? ???? ????? ?? ?? ? ? ???? ???? ???? ?? ??????．? ???琤? ???? ? ? ???? ??? ? ?? ???? ?? ?? ? ???? ???? ? ?甀???? ?? ???? ??? ?? ?? ???? ???? ???????? ? ?? ????．?? ???????? ? ?? ????? ????? ? ?甌???? ? ?? ?? ???? ???? ? ?? ?