低温生物医学技术-第二讲课件精品.pptVIP

怎么评估细胞体积随渗透压的变化 0 1 进行无量纲化处理 1-骨髓细胞；2-酵母细胞；3-仓鼠细胞；4-红细胞 （Mazur,1970） 2.6 细胞低温损伤的机理分析 此图的重要意义在于告诉人们，对于某一种细胞和某一确定的保存方案，确实存在着某种最佳冷却速率，对应最大的存活率，而过快或过慢的冷却速率都会导致细胞的损伤，降低存活率。 细胞低温损伤的两因素假说 存活率 冷却速率 (Mazur,1972) 胞内冰损伤 溶液损伤 总效果 胞外出现冰（胞外冰）； 胞外溶液浓度增加； 胞内水分及时向外渗透; 细胞激烈收缩； 胞内不出现冰（无胞内冰）。 冻结以前: 慢速冷却过程: （细胞小、膜渗透率高、降温慢） 水（多） 胞外溶液 胞内溶液 等渗 不等渗 胞外出现冰（胞外冰）； 胞外溶液浓度增加； 胞内水分来不及向外渗透; 胞内溶液过冷; 胞内出现冰（胞内冰）。 冻结以前: 快速冷却过程: （细胞大、膜渗透率低、降温快） 水(少) 胞外溶液 胞内溶液 等渗 不等渗 2.7 关于两因素假说的深入研究 Leibo 用低温显微系统研究了鼠胚胎，用复杂细胞证实了Mazur的两因素理论。 慢速降温时，细胞逐步脱水收缩；快速降温时，细胞体积没有明显变化，单细胞内部变黑，这是因为胞内冰对光线的散射所致！ 利用低温显微系统，定量研究了胞内冰形成和渗透过程中细胞体积的变化情况 A Microscope Diffusion Chamber For Determination Of The Equilibrium And Non-Equilibrium Osmotic Response Of Individual Cells, J. J. McGrath J. Microscopy, 139, 249-263, 1985. 利用低温显微系统测量了细胞的水渗透率和迁移的活化能 华泽钊（1987）利用自行研制的低温显微系统，研究人体白细胞、肿瘤细胞、鱼胚胎时，观察到：过慢冷却时，细胞剧烈收缩，过快冷却时，出现了胞内冰。 2.8 冻结过程中的未冻水份额 当水溶液或生物样品被冷却至其初始冻结温度后，就不断有冰晶形成和生长。由于冰晶中成分几乎全是纯水，从而提高了未冻基质（unfrozen matrix,UFM）浓度，这种浓度的升高会严重影响生物样品中细胞进行低温冻存时的存活率。 获得未冻水的方法 对于生物样品中未冻水份额一般采用估算方法（利用稀溶液冰点降低性质）； 也有采用一般扫描DSC方法测定（存在热事件滞后）； 华泽钊采用低温显微图象分析法（与图像识别精度有关）； 我们采用分布扫描DSC方法测定（Yi Xu et al,Cryo, 2007）。 ΔH—由DSC获得的焓差；x1—血管干物质的质量分数；x2—血管中DMSO的质量分数；Cp,art—血管干物质的比热，取为1.23J/g.℃[8]；Cp,DMSO—DMSO的比热，取为1.97J/g.℃[8]；y—某一温度T（≤初始冻结温度Tf）下冰晶的质量分数；ΔHlat—某一温度下纯水冰相变潜热，J/g；Tf —初始冻结温度，℃；T —样品温度，℃。 2.9 复温过程中的细胞损伤 在许多情况下，细胞能在最佳冷却速率下降至低温，并长期保存在-196℃。但极有可能在复温过程中遭受损伤而死亡。？ 原因 经冷冻后膜的渗透率发生变化，可能造成渗透率过大或过小，甚至完全没有渗透功能。 渗透率未变，但复温过程发生细胞溶解。 复温过程发生再结晶。 胞内冰的形成一定会对细胞产生致命的损伤吗？ Mackenzie（1970）将酵母细胞快速冷冻至-196℃，然后分批慢速复温至不同温度，再快速复温，分别测定细胞存活率。 Bank(1970)将酵母细胞快速冷冻至-196℃，然后分批慢速复温至不同温度，再快速冷冻至-100℃ ，分别进行低温电镜观察再结晶情况。 结论：快速冷却过程中产生的胞内冰本身对细胞并非致命的损伤，但若在复温过程中速率过慢，使胞内冰再结晶，则对细胞的损伤是致命的；如果采取快速复温仍可能使细胞有教高存活率。复温速率越快越好吗？ 2.10 造成损伤的其他因素 抗冻剂的种类、浓度及加入和取走的方式（保护剂毒性） 过高的存储温度（再结晶） 下次讨论问题 纳米颗粒（nano-particles）对低温保护剂（cryoprotectant）溶液以及生物样本在冻结过程中冰晶成核(ice nucleation)的影响。 要求：（1）以上面几个关键词，从学校网上图书馆数据库sciencedirect（/）搜索相关文献1篇（以英文为主）；（2）每个人针对这篇文献，