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胚胎干细胞 一、胚胎干细胞概念 二、胚胎干细胞发展史 三、生物学特性 四、胚胎干细胞的体外分化 五、胚胎干细胞的应用发展 六、胚胎干细胞研究与社会伦理的冲突 一.概念 胚胎干细胞(embryonic stem cell，ESCs，简称ES、EK或ESC细胞。)，是早期胚胎(原肠胚期之前)或原始性腺中分离出来的一类细胞。 具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型 ;胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells)起源于囊胚(Blastocyst)内部细胞(Inner Mass Cells)，为多能干细胞，它可以成为任何组织，但不包括胎盘。只有桑椹胚(Morula)的细胞是全能的，可以成为所有组织或胎盘。 二、胚胎干细胞发展史 （1）Evans和Kaufman（1981）首次分离得到小鼠ES细胞，他们将回收的胚胎体外培养于小鼠胎儿成纤维细胞（STO）饲养层上得到了小鼠ES细胞系。 （2）Wobus等（1984）首次用鼠胚原代成纤维细胞（PMEF）为饲养层建立了小鼠ES细胞系。 （3）Pease等（1994）借助重组白血病抑制因子（LIF）代替成纤维细胞饲养层，分离得到三个ES细胞系。 （4）Munsie等（2000）从以小鼠颗粒细胞为核供体构建的重组胚ICM中分离出了核移植ES细胞，它具有正常小鼠细胞的形态特征和细胞表面标记。 目前，小鼠ES细胞的分离方法基本成熟，已被广泛运用于生命科学研究的多个领域。 二.生物学特性 （1）来自正常的胚胎具有完整的二倍体核型； （2）体积小、核大、胞质少，有1或2个核仁，细胞间紧密的聚集在一起，细胞间界限不清，呈集落型生长，集落边缘清晰，遮光性强。 （3）表达早期胚胎细胞特异表达的基因，如：AKP(碱性磷酸酶 )、高端粒酶基因活性。 （4）无限增殖能力。 （5）广泛的体外分化能力。 （6）广泛的体内分化能力。 （7）具有种系传递动能。 （8）在体外培养、克隆、冻存及进行遗传操作 （导入基因、标记基因或剔除基因）。 端粒（Telomere）是真核细胞染色体末端的特殊结构。人端粒是由6个碱基重复序列（TTAGGG）和结合蛋白组成。端粒有重要的生物学功能，可稳定染色体的功能，防止染色体DNA降解、末端融合，保护染色体结构基因DNA，调节正常细胞生长。正常细胞由于线性DNA复制5‘末端消失，随体细胞不断增殖，端粒逐渐缩短，当细胞端粒缩至一定程度，细胞停止分裂，处于静止状态。 。 端粒酶（Telomerase）是使端粒延伸的反转录DNA合成酶。是个由RNA和蛋白质组成的核糖核酸-蛋白复合物。其RNA组分为模板，蛋白组分具有催化活性，以端粒3末端为引物，合成端粒重复序列。端粒酶的活性在真核细胞中可检测到，其功能是合成染色体末端的端粒，使因每次细胞分裂而逐渐缩短的端粒长度得以补偿，进而稳定端粒长度。主要特征是用它自身携带的RNA作模板，以dNTP为原料，通过逆转录催化合成模板链5‘端DNA片段或外加重复单位。 端粒酶能延长缩短的端粒（缩短的端粒其细胞复制能力受限），从而增强体外细胞的增殖能力。端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制，在肿瘤中被重新激活，端粒酶可能参与恶性转化。 ES细胞在体外的培养过程中能够在有饲养层细胞或分化抑制因子（DIA），白血病抑制因子（LIF)等存在的条件下维持其未分化的状态，保持发育全能性，可以无限增 殖。 四.胚胎干细胞的体外分化 ES细胞体外分化的基本原理 但一旦除去饲养层细胞，除去这些抑制分化因子，或者添加一些诱导分化因子（维甲酸RA，神经生长因子NGF等，就会向各类可能的细胞发生定向分化。 对小鼠ES细胞进行各种方式的诱导分化，可以获得神经细胞,造血祖细胞，成骨细胞，干细胞，角质细胞，胰岛细胞和滋养细胞等各种细胞。 ES细胞体外分化模式 一、自发分化 二、诱导分化 三、基因调控分化 自发分化 在实际研究中，目前一般的思路是先诱导胚胎干细胞形成胚状体，然后再从胚状体中分离所需要的目标细胞，进而扩大培养和利用。 胚状体的制备可以采用悬滴培养的方式，将干细胞以较高的浓度移入含有甲基纤维素的悬挂的培养基液滴中，使其聚集生长增值，由此便可形成具有三维特征的球状体。 在胚胎干细胞分化表型中，最为直观的是原始心肌细胞的表型出现。 诱导分化 诱导分化是将ES细胞与不同类型的细胞共培养或添加相应的诱导因子能够诱导肝细胞发生向单一类型细胞的定向分化。 基因调控分化 利用ES细胞体外遗传的可操作性，通过强化或抑制某些基因的表达来形成单一