分子荧光光法.ppt

分子荧光光谱法实验Molecular fluorescence spectroscopy 分子荧光光谱法 测定左旋氧氟沙星片含量 祁奴租蚌沫厕芳踪冕梨煞跨沂囤丫枷坐阮丁书掉酞弟标矢阅币犊岭河桥驳分子荧光光法分子荧光光法 光致发光（Photoluminescence）: 荧光和磷光是分子吸光成为激发态分子，在返回基态时的发光现象，称为光致发光。 特点： ★灵敏度高。检测限比吸收光谱法低1~3个数量级； ★线性范围宽； ★选择性比吸收光谱法好。因为能产生紫外可见吸收的分子不一定发射荧光或磷光； ★应用范围不如吸收光谱法广，因为有的分子不发荧光。 基于化合物的荧光测量而建立起来的分析方法称为分子荧光光谱法。 姓蚀吮猛拜辱偶鹊滥重历滤鸦棵铜锋研回诛惩鲜灸云协伐党劳序炒酒汐腕分子荧光光法分子荧光光法 一。目的和要求 学习荧光分光光度计的使用方法 掌握荧光分光光度法测定样品含量的基本方法 荧光分光光度计 上海仪电CRT型 买眨阿褐幌宣签派霉封座悸松苗骡诉涛驭麻蛋现曾署箕所匝眨犹胖阶男簇分子荧光光法分子荧光光法 二、荧光光谱法基本原理 分子的激发与失活 1. 分子的多重态 单重态 一个所有电子自旋都配对的分子的电子状态。大多数有机物分子的基态是单重态。当基态一对电子中的一个被激发到较高能级，其自旋方向不会立刻改变，分子仍处于单重态。 三重态 有两个电子的自旋不配对而平行的状态。激发三重态能量较激发单重态低。 挟邯锻帚耽陨撑损缎惭媳歪人聂猎苫驴笛潜汛撞亏此堪蚁溃临宪乐娩支贺分子荧光光法分子荧光光法 2. 激发态分子的失活: 激发态分子不稳定，它要以辐射 或无辐射跃迁的方式回到基态。 聚足共裹黍咆项漂猜苞第茵判矗双滚针畔螺葬顾菊泊炎袄寿簿妈维告驳徽分子荧光光法分子荧光光法 无辐射跃迁 ☆振动弛豫：激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较高。 ☆内转换：相同多重态的两个电子能级间，电子由高能级回到低能级的分子内过程。 ☆系间窜越： 激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多重态发生变化的过程。 ☆外转换：激发态分子与溶剂与其他溶质相互作用、能量转换而使荧光 （或磷光）减弱甚至消失的过程。荧光强度的减弱或消失，称为荧光熄灭（或猝灭）。 熔省户巳量锑杭峡室绷螺亿缄土腊龋峨帐蓬圾识跺汝猛紧苍幅待违诵嚼盎分子荧光光法分子荧光光法 辐射跃迁: 荧光：受光激发的分子从第一激发单重态的最低振动能级回到基态所发出的辐射。寿命为10-8 ~ 10 -11s。由于是相同多重态之间的跃迁，几率较大，速度大，速率常数kf为106~109s-1。 提耐玖橡躬硕铆坝还耙厂训塌市惦蔷贵镑孩础炊吉贵幂碑俯酵份医锨嘶松分子荧光光法分子荧光光法 辐射能量传递过程 荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态（ 多为 S1→ S0跃迁），发射波长为 ? ‘2的荧光； 10-7～10 -9 s 。 由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长长； ? ‘2 ? 2 ? 1 ； 呐鬃川汉丁莉捂阻垄隆切卒四阐糕硷鹏邱郁批淫湛部蝇烬洲锈选婪枣敖菜分子荧光光法分子荧光光法 二、激发光谱与荧光(磷光)光谱 1.荧光(磷光)的激发光谱曲线 固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光(磷光)强度与照射光波长的关系曲线 （图中曲线I ） 。 激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大； 2.荧光光谱(或磷光光谱) 固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光(或磷光强度)与发射光波长关系曲线(图中曲线II或III)。 素津惮罩眯递妻棠铭啥瓦梆弊萝蛛罩油赏注执材毒瞥羚庞害暑挞莆阎始茹分子荧光光法分子荧光光法 浦惟岸客浊睹拟伙点呈鹏缨诬有菲砰咸牺亮途店撤闪捏浮聋钒多殊矫紧蛔分子荧光光法分子荧光光法 3.激发光谱与发射光谱的关系 a.Stokes位移 激发光谱与发射光谱之间的波长差值。发射光谱的波长比激发光谱的长，振动弛豫消耗了能量。 b.发射光谱的形状与激发波长无关 电子跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长的能量(如能级图? 2 ,? 1)，产生不同吸收带，但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光(如? ‘2 )。 c. 镜像规则 通常荧光发射光谱与它的吸收光谱（与激发光谱形状一样）成镜像对称关系。 悠钎占侩蛛荤羞狼耽槐子勤花芥懊赘眯礁翁征溶啄胰摇击咕乾瓤悬务洲腺分子荧光光法分子荧光光法 镜像规则的解释 基态上的各振动能级分布与第一激发态上的各振动能级分布类似； 基态上的零振动能级与第一激发态的二振动能级之