仪器分析-高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因的含量中.doc

反相高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因的含量 前言： 本次实验报告在前言中简单阐述HPLC基本原理，介绍HPLC仪器的结构特点和应用范围；研究对象的化学结构、理化常数和文献报道测定方法。 咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因1.2%－1.8％，茶叶约含2.0%－4.7％。可乐、APC药片中均含有咖啡因。其分子式为C8H10O2N4，结构式： 一、仪器与试药 高效液相色谱仪（日本岛津）。 咖啡因对照品；甲醇为色谱纯；百事可乐（康师傅乌鲁木齐饮品有限责任公司）；红牛（红牛维他命饮料有限公司）；叶尔羌茶（新疆叶尔羌茶有限责任公司）。 二、方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：C18（4.6x150mm，5μm），流动相：甲醇:水=30:70，测定波长280nm，柱温30℃，流速：1ml/min，进样量：10μL。 2.2 系统适用性实验 取供试品20μL进样，记录色谱图，咖啡因峰的保留时间为4.253 min，各峰与相邻峰的分离度为 ，拖尾因子为 ，符合药典规定，理论塔板数按咖啡因峰计算大于2000。对照品及供试品的色谱图如下： ⑴ 对照品的色谱图 ⑵ 供试品的色谱图 2.3 溶液制备 精密称取咖啡因对照品10mg，加甲醇定容至10ml。吸取上述溶液0.5ml，加甲醇稀释到10ml，则溶液浓度为50μg/ml。 供试品溶液： ⑴百事可乐：取30ml的可乐放入烧杯中，用超声波脱气15min，驱赶饮料中的二氧化碳，用移液管精密移取1ml的可乐脱气饮料，用水稀释至10ml。 ⑵红牛饮料：用移液管精密移取1ml的红牛饮料，用水稀释至10ml。 ⑶取一包叶尔羌红茶，取50ml沸水浸泡1小时，后取该溶液1ml, 用水稀释至25ml。 方法学考察 线性范围考察 分别量取贮备液5个以上浓度的样品，置于10ml容量瓶，稀释至刻度，得到对应的浓度系列标准溶液。取上述系列浓度溶液经0.22μm的微孔滤膜过滤，进样，得系列浓度对应峰面积和保留时间。以标准溶液的质量浓度（X）为横坐标，色谱峰面积（Y）BX（请将下图中的线性方程在此写出），相关系数为r= 0.9988 ，表明咖啡因在 0.4945-2.4725 浓度范围内线性关系良好。 表1 标准曲线 编号 1 2 3 4 5 浓度（单位） 4.945 9.89 14.835 19.78 24.725 峰面积 163089 265524 399522 539260 655983 2.4.2 加样回收率试验（仅设计实验内容） 精密称量取9份已知含量的同批样品，分为3组，按低、中、高浓度分别加入咖啡因对照品储备液，均定容到一定体积后，进样测定，计算加样回收率。用 9 个测定结果进行评价，一般中间浓度加入量与所取供试品含量之比控制在 l 1 左右，其他两个浓度分别约为供试品含量的 80% 和 120% 。