分子生物学复习题中.doc

1.真核生物基因组织结构特点 1）真核生物基因组庞大，远大于原核生物基因组。有许多复制起点，每个复制子的长度较小。 2）真核基因组的DNA与蛋白质结合形成染色体。 3）真核基因组转录产物为单顺反子：一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA分子和一条多肽链。 4）真核基因不连续性，是断裂基因，有内含子和外显子结构。 5）真核基因组的多为非编码序列，多于编码序列(9:1)，这是真核生物与细菌和病毒之间最主要的区别。 6）真核生物基因组存在大量的重复系列。重复次数可达百万次以上。 7）真核基因组存在大量的顺式作用元件（启动子，增强子，沉默子）。 8）真核基因组存在大量的DNA多态性。 9）真核基因组具有端粒结构。 DNA修复系统有哪几种 指导RNA和RNA的编辑机制： 指导RNA与被编辑区及其周围部分核酸序列虽然有相当程度的互补性，但该RNA上存在一些未能配对的腺嘌呤，形成缺口，为插入尿嘧啶提供了模板。理学意义：(1) 校正作用：有些基因在突变过程中丢失的遗传信息可能通过RNA的编辑得以恢复；(2) 调控翻译：通过编辑可以构建或去除起始密码子和终止密码子，是基因表达调控的一种方式；(3) 扩充遗传信息：能使基因产物获得新的结构核功能，有利于生物的进化。 什么是密码子密码子的性质 密码子：mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为密码，也叫三联子密码。 密码子的性质： （1）密码的简并性：由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并；对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子。 （2）普遍性：遗传密码无论在体内还是体外，也无论是对病毒、细菌、动物还是植物、人类都是适用的，所以，密码子具有普遍性。 （3）特殊性：动物细胞的线粒体、植物细胞的叶绿体已发现少数例外。 （4）连续性：编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码间既无间断也无交叉。 （5）摆动性：在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可以摆动，这种现象称为密码子的摆动性。 泛素化修饰涉及泛素激活酶E1、泛素结合酶E2和泛素连接酶E3的一系列反应:首先在ATP(红色所示)供能的情况下酶E1(蛋白质编号1r4n)粘附在泛素分子尾部(淡黄色所示)的Cys残基上(绿色所示,注意在这个结构中,Cys突变为Ala)激活泛 素,接着,E1将激活的泛素分子转移到E2酶上(蛋白质编号1fxt),随后,E2酶和一些种类不同的E3酶共同识别靶蛋白,对其进行泛素化修饰。根据E3与靶蛋白的相对比例可以将靶蛋白单泛素化修饰和多聚泛素化修饰。E3酶(蛋白质编号1ldk和1fqv)的外形就像一个夹子,靶蛋白连接在中间的空隙内(星号所示)。酶的左侧结构域决定靶蛋白的特异性识别,右侧结构域定位E2酶以转移泛素分子。蛋白质泛素化的结果是使得被标记的蛋白质被蛋白酶分解为较小的多肽、氨基酸以及可以重复使用的泛素。PCR扩增及引物的设计原则 PCR是指那些模拟体内DNA复制的方式在体外选择性地扩增DNA某个特殊区域的技术。 PCR：在有扩增模板DNA、dNTP Mix、上下游扩增引物、Taq DNA聚合酶存在的情况下，根据人类的需要在体外特异扩增上下游引物之间基因片段的过程。 引物的设计原则： ① 引物的长度为15～25个核苷酸； ② 引物碱基，G+C含量以45％～55％为宜；G+C太少扩增效果不佳，如太多则易出现非特异条带。ATCG最好是随机的分布，以避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列； ③ Tm值（退火温度）高于55℃； ④ 引物扩增跨度以300－500bp为宜，特定的Taq酶可以扩增至10kb的长片段； ⑤ 引物3’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR的失败； ⑥ 避免引物自身配对（特别是在引物的3’端）形成的茎环结构，茎的碱基对数不大于3； ⑦ 避免引物内部出现二级结构，引物不能含有自身互补序列，避免两条引物间互补，特别3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带； ⑧ 引物的特异性，引物应与核苷酸序列数据库的其他序列物明显同源性； 植物基因组DNA的提取原理（CTAB原理） CTAB（十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。 在高离子强度的溶液中（0.7mol/L NaCl），CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 15.真核细胞与原核细胞在基因转录，翻译及DNA的空间结构方面存在的差异 ① 在真核细胞中，一条成熟的mRNA链只能翻译出一条多肽链，很少存在原核生物中常见的多基因操纵子形式。