2-2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数1.pptxVIP

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标：1、理解从土壤中分离出能够分解尿素的细菌的原理，能正确计算每克土壤样品中尿素细菌的数目。2、熟悉实验流程、操作要求3、能正确分析导致实验结果异常的原因一、研究思路尿素分子的立体结构㈠. 筛选菌株CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3脲酶1、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。㈠. 筛选菌株PCR技术是一种常用的DNA扩增技术，此项技术的自动化，需要使用耐高温的DNA聚合酶，如果请你来找这种耐高温的酶，你会去哪里找？水生耐高温细菌Taq热泉70-80摄氏度的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而耐热的Taq细菌脱颖而出。启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。2、实验室微生物的筛选原理（P21） 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。2、实验室微生物的筛选原理（P21） 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。3、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。加入青霉素的培养基 ——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长不加含碳有机物的无碳培养基 ——分离自养型微生物阅读22页本课题使用的培养基配方 （1）在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？碳源是葡萄糖和尿素，氮源是尿素（2）分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。（二）统计菌落数目显微镜直接计数法稀释涂布平板法（活菌计数法）1、显微镜直接计数法1mm血细胞计数板每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　　下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少?1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）　5A5 A B×104缺点：不能区分死菌与活菌1mm2、统计菌落数目——稀释涂布平板法平板菌落数统计注意事项1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个；2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；交流1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）A.2.34×108　B.2.34×109C.234　D.23.4【解析】稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。选B。每mL样品中的菌株数=（C÷V）×MC：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积M：稀释倍数交流2：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。如何保证计数结果准确？ 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。　交流3：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。实例分析1第一位同学结果不具有说服力。 因为只涂布了一个平板，没有设置重复组第二位同学不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。因为其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误。启 示(1)在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。(2)在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否基本一致，结果相差太大，意味着操作有误，需要重新实验。实例分析2想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异 如此之大，请分析原因可能有哪些？①②③实例分析2想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？一种方案： 可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。实例分析想一想：你能通过设置对照