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高效率构建包含内含子的hpRNAi植物载体 摘要 在植物基因功能分析中广泛使用的双链RNA干扰（RNAi）是一种高效率的系统，对于制作发夹RNA（hpRNA）结构有一个很大的需求量。在这里，我们描述了一种新的限制性连接方法，提供了包含内含子的hpRNA（ihpRNA）载体的一种简单而高效的建设。该系统以优势型IIS的限制性内切酶BsaI和我们新的植物RNAi载体pRNAi-GG（GG）以GG克隆为基础。这种方法需要有感兴趣的基因的BsaI识别序列侧翼只有一个单一的PCR产物，然后可以克隆到pRNAi-GG上在正方向和反方向同时形成ihpRNA的构造。在这个过程中，在一个管与一个限制性连接步骤完成后，产生的重组ihpRNA具有高效率和零背景。我们证明与pRNAi-GG载体向量生成的ihpRNA结构的效用有效沉默各种单独的内源和外源标志物基因以及同时沉默这两个基因。此方法提供了植物功能基因组学的大规模分析的新颖的和高效率的平台。 介绍 在双链RNA被发现作为一体的能触发RNA干扰（RNAi）之后[1]，RNA干扰也成为一个基因功能[2-4]分析的最强大的工具。 发夹RNA（hpRNA）结构通常用于通过RNA干扰[5]的机制来诱导靶基因的degra-dation。在植物中，含有发夹RNA的内含子（ihpRNA）配有一个内含子作为间隔序列表示出了最高基因沉默效率[6]。因此，ihpRNA结