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实验二：食品中对羟基苯甲酸酯类的检测方法 201030600628 2010级食品营养1班 杨柳 对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂。对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，则会危害人体健康。各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760《食品添加剂使用卫生标准》明确规定了使用范围和最大使用量。不同商品中的最大限量：对羟基苯甲酸甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。学习高效液相色谱标法定量熟悉超高压液相色谱的分析操作在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有酯类，它们都是强极性化合物，采用液相色谱进行分析。对羟基苯甲酸酯类对羟基苯甲酸酯类对羟基苯甲酸酯类对羟基苯甲酸酯类对羟基苯甲酸酯类对羟基苯甲酸酯类 实验材料与仪器 3.1材料：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯对羟基苯甲酸丁酯、乙腈、甲醇均为分析纯、超纯水 Waters超高压液相色谱仪（ACQUITY）、超声波清洗仪、超纯水制备仪标准液的制备标准混合使用液对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯一只10mL容量瓶中，配制浓度均含μg·mL-1 的酯类混合物的溶液，混匀备用。实验条件的选择 (1) 色谱柱(2) 流动相 ：水（：），流量mL·min-1 (3) 监测器 紫外光度监测器，254nm，灵敏度0.04 (4) 记录仪 量程5mV，纸速480mm·h-1 (5) 进样量 μL (6) 柱温 40℃ 4.4测定 (1) 将配制好的流动相置于超声波发生器上脱气15min。 (2) 根据实验条件，将液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时，记录仪基线呈平直，即可进样。 (3) 依次分别吸取μL的标准混合使用液和未知试液进样，记录各色谱图在每次进样后，于进样信号附近标明进样溶液的名称。 保留时间（分钟） 面积 微伏/秒 1 5.131 513846 2 7.422 534453 3 11.699 536248 标品 保留时间（分钟） 面积 微伏/秒 1 4.959 989305 2 7.147 1059467 3 11.264 1084164 5.2以对羟基苯甲酸酯类对羟基苯甲酸酯类）对羟基苯甲酸酯类）4.959 4 989305 513846 2.0776 2 7.147 4 1059467 534453 2.0178 3 11.264 4 1084164 536248 1.9785 5.3标准曲线的绘制，如图2 图2 样品中对羟基苯甲酸酯类的含量标准曲线 6 实验结果讨论及思考 6.1高效液相色谱仪使用注意事项： （1）对色谱柱来说，在通常的分析条件下，可长时间使用，但如发生杂物吸附或由微粒引起的堵塞时，则其性能大大降低，为延长色谱柱寿命建议使用保护柱。（2）若直接注入浑浊的试样或含有微粒的试样，则会成为流路或色谱柱堵塞的原因，请用0.2～0.5um左右的圆盘过滤或离心沉淀来去除杂物。 （3）在流动相水溶液中含有眼睛所看不到的很多离子及微生物，如在此状态下直接使用时，则会造成过滤器及色谱柱的堵塞以至压力上升或色谱柱劣化，无法进行良好的分析，建议将流动相水溶液用0.22um的膜滤器减压过滤后使用。 （4）压力不能太大,最好不要超过30Mpa,防止过高压力冲击色谱柱。 （5）每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐,防止无机盐沉积和样品微粒磨损阀转子;使用完毕后须在记录本上记录使用情况。 ⒍色谱柱若不用,在卸下前必须洗去缓冲液,并用大于10%的有机溶剂充满整个色谱柱,卸下柱后,用柱堵头将色谱柱首尾密封。 6.2本实验为什么采用反相液相色谱，试说明理由。 答：流动相极性大于固定相极性的色谱称为反相色谱，反之称为正相色谱。本实验所用样品均为极性化合物，依据“相似相溶”原则，宜选用极性固定相、非极性的流动相，即选择正相色谱。但是，高效液相色谱的可贵之处是它的分离效能很高，对于极性化合物往往用反相色谱也能实现很好的分离，而且，反相色谱的流动相通常使用甲醇和水，价格远低于正相色谱通常使用的正己烷。 6.3高效液相色谱分析的流动相为何要脱气，不脱气对实验有何妨碍？ 答：流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定