8第八章基因工程下游技术18273幻灯片.pptVIP

重组蛋白可在E.coli、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等体系中得到高效表达,其表达形式一般可分为: (1)细胞外的分泌表达; (2)细胞内可溶性表达; (3)细胞内不溶性表达,即产物以包涵体的形式存在。 因此对于重组蛋白的纯化要依据其表达形式的不同,采取不同的纯化工艺。例如,当重组蛋白以包涵体形式存在时,就需要对包涵体进行变性-复性处理。 四、基因工程产品的表达形式 2011-10-30 * 基因工程下游技术 1.细胞质表达 很多利用大肠杆菌为宿主细胞的外源基因表达产物如尿激酶、人胰岛素、人生长激素、白介素-6、人γ-干扰素等，不仅不能分泌到细胞外，反而在细胞内聚集成没有生物活性的直径约0.1～3.0μm的固体颗粒——包涵体。这些基因表达产物的一级结构(即氨基酸序列)虽然正确，而其立体结构是错误的，所以没有生物活性。因此，为获得天然状态的目标产物，必须在分离回收包涵体后，溶解包涵体并设法使其中的目标蛋白质恢复应有的天然构象和活性。 2011-10-30 * 基因工程下游技术 包涵体的形成：原核、酵母和真核生物由于异源和同源蛋白过表达所形成的致密的不溶性颗粒。包涵体的形成与过表达蛋白的内在性质（如分子量、折叠途径等）无直接关系。因为大肠杆菌胞质环境是一个还原性环境，所以含有较多二硫键的蛋白较容