影响_MS培养基凝固效果的几个因素的研究.docVIP

影响 MS培养基凝固效果的几个因素的研究在植物组织培养过程中， 一般用琼脂作固化剂使培养胶化， 其凝固效果直接关系培养材料的生长或生存。 目前已有不少关于培养基高温高压灭菌后 pH值变化的研究；但对于影响培养基凝固效果的具体因素研究极少。笔者以 MS 培养基为对象， 探讨影响其凝固效果的多方面因素， 以利于组培材料的生长。 1 材料与方法 1.1材料与药品 M S培养基；琼脂条( 海洋食品有限公司制) ； 琼脂粉( 日本进口， 上海化学试剂) ；碳源：蔗糖、果糖、食用白糖、葡萄糖；活性炭。 1.2方法 将母液兑成完全 M S培养基，用稀HC1或稀NaOH调节培养基的pH值至所需水平，在每个容量为 50m l的三角瓶中统一装入 30 m l培养基。在不进行其相关因素实验时，培养基中都是添加了3％蔗糖和 0.8％的琼脂粉，分装前pH值调至 5.8 ，118 ～120灭菌20 min。pH计型号pHS-3 c型酸度计，采用全量程复合玻璃电极，可精确设置被测溶液的温度，实现温度补偿，读数准确，方便快捷。3 次重复，灭菌后培养基置于25室内1h后观察，采取多次观察分析，用平均值进行结果统计。 2 结果与分析 2.1 琼脂浓度和培养基pH值对培养基凝固效果的影响 2.1.1 琼脂的浓度对MS培养基凝固效果的影响。表 1 显示，琼脂作为固化剂对培养基的凝固有直接影响，浓度的高低直接关系到培养基的凝固效果，培养基的凝固效果与琼脂用量呈正相关。一般情况下，琼脂浓度低于0.6％，培养基就不能很好地凝固，当浓度达0.8 ％一般就能满足实验要求。琼脂在培养基中仅作为固化剂，但其中含有多种杂质成分，可能对培养基成分会有一定的影响，在用量上应加以考虑。日本进口的琼脂粉比琼脂条的凝固效果稍好 ，主要是因为琼脂条的杂质多，琼脂粉的有效成分相对高一些。这与陈永勤的研究结果相反。 表 1 琼脂浓度和培养基 pH值对培养基凝固效果的影响 琼脂浓度 g/L 培养基pH 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 5 A(a) A(a) A(a) B(a) B(b) C(b) C(b) C(c) C(c) C(c) C(c) 6 A(a) A(a) A(a) B(b) B(b) C(c) D(c) D(d) D(d) D(d) D(d) 7 A(a) A(a) B(a) B(b) C(c) D(d) D(d) D(d) E(d) E(e) E(e) 8 A(a) A(a) B(b) C(c) D(d) D(d) E(d) E(d) F(f) F(f) F(f) 9 A(a) B(a) C(c) C(c) E(d) F(e) F(e) F(f) F(f) F(f) F(f) 10 A(a) B(b) C(b) C(c) E(d) F(e) F(f) F(f) F(f) F(f) F(f) 11 B(a) B(b) C(c) D(c) E(e) F(f) F(f) F(f) F(f) F(f) F(f) 注： 大、 小写字母分别表示进口琼脂粉和国产琼脂条。A或( a ) ， 凝固很差、 完全液体状态； B或( b ) ， 凝固差、 稀糊状； C或( c ) ， 凝固一般、 轻晃动时会滑动； D或( d ) ， 凝固较好、 不太滑动； E或( e ) ， 凝固好、 不滑动； F或( f ) ， 凝固很好、 很硬、 培养基上有一层水。下表同。 2.1.2 pH值对MS培养基凝固效果的影响。M S培养基的凝固与p H值呈正相关。当p H值低于 5.5 0时， 培养基一般不能很好地凝固， 随 pH值的提高，培养基的凝固效果明显改善。植物组织在一定pH值下才能正常生长，因此在配制时考虑培养基凝固情况的同时， 也要注意 pH值的大小。 2.1.3 琼脂的用量与培养基 pH值的互补作用。试验表明，当琼脂浓度过小时， 可通过提高培养基的pH值来改善凝固效果；当pH值低时也可以通过增加琼脂的浓度来改善凝固效果 ， 这与陈永勤的研究相一致。 2.2 碳源对 MS培养基凝固效果的影响 在培养基中一般要加入一定量的碳源， 碳源有降低培养基灭菌后凝固效果的效应。表 2显示， 碳源添加后，灭菌后培养基的凝固效果明显降低，降低程度与所添加的碳源量呈正相关； 不同碳源培养基的下降程度有差异：添加 3％蔗糖、2％食用白糖、1％葡萄糖或1％果糖时就能明显降低培养基灭菌后的凝固效果。相同条件下， 果糖与葡萄糖的影响较大， 能显著降低培养基的凝固效果，下降程度是果糖 葡萄糖 食用白糖蔗糖。 添加一定量的碳源促进了培养基灭菌过程中pH值的下降。B a l l 认为在高温灭菌时， 培养基中蔗糖会水解成果糖和葡萄