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生物学实验教学中心 CO2培养箱 CO2培养箱使用注意事项 CO2培养箱使用注意事项 CO2培养箱使用注意事项 CO2培养箱使用注意事项 CO2培养箱使用注意事项 CO2培养箱使用注意事项 CO2培养箱使用注意事项 CO2培养箱使用注意事项 CO2培养箱使用注意事项 细胞培养室 细胞培养室 细胞培养室使用注意事项 细胞培养室使用注意事项 细胞培养室使用注意事项 细胞培养室使用注意事项 细胞培养室使用注意事项 细胞培养室使用注意事项 光学显微镜的使用 李 东 生物学实验教学中心 —、普通光学显微镜 —、普通光学显微镜 二、荧光显微镜 二、荧光显微镜 二、荧光显微镜 三、倒置相差显微镜 三、倒置相差显微镜 三、倒置相差显微镜 用ＭＴＴ比色法测定细胞相对数 制备细胞爬片 制备细胞爬片 制备细胞爬片 细胞爬片的免疫化学染色法 细胞爬片的免疫化学染色法 细胞爬片的免疫化学染色法 细胞爬片的免疫化学染色法 Wenzhou Medical College 　 7、置于室温下干燥1小时，如暂不染色，先放在-20 冰箱中保存。 8、取出盖玻片时注意盖玻片的正反面（有细胞的为正面）。 Wenzhou Medical College ?1、在细胞爬片上加0.03% Triton X-100 水溶液处理15min。（若是要检测的抗原表达于胞浆，此步可考虑省略） 2、 吸除0.03% Triton X-100，加3%H2O2 孵育10min。 3、 吸除3%H2O2，加2%牛血清白蛋白封闭30～60min。PBS 洗5min。 Wenzhou Medical College 4、 吸除PBS，分别滴加相应的一抗（用含1%牛血清白蛋白的PBS 液稀释到合适滴度），置于37℃孵育1h，或置于4℃冰箱中过夜。阴性对照片此步用PBS 替代一抗。 5、 吸去一抗，PBS 漂洗3 次，每次5min。滴加山羊抗鼠的IgG 抗体-HRP多聚体，37℃孵育30min。 Wenzhou Medical College 6、 PBS 漂洗3 次，每次5min。新鲜配制DAB 显色液，滴加后作用3～5min，置于显微镜下观察染色结果。 7、 双蒸水漂洗后，滴加苏木精染液，染色10min。 8、 双蒸水漂洗后，滴加0.5%HCl-70%Ethanol，作用1min 以分色。 * Wenzhou Medical College Central Laboratory of Biology CO2培养箱使用 李 东 Wenzhou Medical College 全世界的用户对二氧化碳培养箱都有两条最基本的要求，一是要求二氧化碳培养箱能够对温度、二氧化碳浓度和湿度提供最精确稳定的控制，以便于其研究工作的进展；二是要求二氧化碳培养箱能够对培养箱内的微生物污染进行有效的防范。 Wenzhou Medical College 一、二氧化碳进气压力：0.08~0.1 MPa ( 0.8-1 bar ) 压力表选用：初级压力25MPa，次级压力0.2MPa 。松→紧 压力 低→高。进气正常的现象。压力过高的危害，注意安全。压力调节稳定需要时间，原因：残余气体，压力表不稳。。 二、温度控制 培养箱的最低工作温度一般是高于室温5°C ，空气循环提高温度均一性。温度恢复时间（37℃），开门时间过长，超温；水盘的水温影响。门加热系统，即使箱内相对湿度高达98%，所有内壁表面亦能保持完全干燥 。 ▼ Wenzhou Medical College Wenzhou Medical College Wenzhou Medical College ▲幻灯片 3 Wenzhou Medical College 三、二氧化碳浓度控制 按培养基中的NaHCO3设定二氧化碳浓度：NaHCO3 1.97g/L ，CO2浓度5% ； NaHCO3 3.95g/L， CO2 10% 。RPMI1640培养基每升2.1g碳酸氢钠；DMEM每升3.7克碳酸氢钠；F12 NaHCO3 1.18g/L ;DMEM/F12 NaHCO3 2.56 g/L 。 HEPES 缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34g/L）共用，以抵消因额外加入HEPES 引起的渗透压增加。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。 注意 Wenzhou Medical Col