现代生物技术03动物基因工程（参考）.ppt

转基因牛技术评价 尽管转基因牛有很好的发展前途，然而转基因牛的大量生产却进展缓慢，因为获得转基因牛比获得其他转基因动物要更加困难。一般来说，利用微注射法把外源基因注入精前核时，要利用微分干涉相差显微镜[differential interference contrast (DIC) microscopy]才能分辨精前核；DIC显微镜能分辨羊和兔的精前核，但是难以分辨猪、牛等的精前核，还需对它们进一步进行超速离心才可能分辨出，这就增加了操作的难度。而且，从受精卵发育成小牛差不多要花费两年的时间，且牛每胎产仔的数目很少，这又进一步提高了成本。 2、 转基因绵羊、山羊和猪 对绵羊、山羊的转基因研究大多集中于利用其乳腺作为生物反应器生产药用蛋白。 虽然绵羊、山羊的产奶量比奶牛低，但它们每年也能生产几百升，同时，转基因羊比转基因牛更容易获得。 有人采用与生产转基因鼠类似的方法，构建了用乳腺特异性启动子驱动的编码人类基因的载体(表12—4)，得到的转基因绵羊和山羊，它们都能将表达的人类蛋白质分泌到乳汁中(图12—16)。 转基因羊表达的转入基因编码的蛋白质是经过糖基化的，理论上讲应该同从人体内提取的蛋白质一样具有生物活性。但是，要确定转基因动物乳腺所生产的蛋白质与人的蛋白质的天然形式是否完全相同，还需进行更深入的研究。 图12—16 12-17 图12－17 图2－16 转基因猪 猪的转基因实验，以转化人的血红蛋白基因最为成功。具体做法是：将人β珠蛋白基因的调控区域与两个人αl珠蛋白，一个人βa珠蛋白基因相连接，构建载体。得到的转基因猪在血液中表达了人的血红蛋白，人们根据各种化学标准检测发现，它们与天然的人血红蛋白性质完全相同。 也许在不远的将来人们就可以用转基因动物生产的人血红蛋白来辅助输血了。 3、 转基因鱼 利用转基因技术改变鱼的遗传品质，作为重要的模式动物用于研究脊椎动物的发育、癌基因的功能及激素对脊椎动物的生长发育的影响等基础研究成为重要的研究目标。 要获得转基因鱼，首先要选择适当的鱼类品种作为基因的受体。迄今为止，人们已经运用微注射法向很多种鱼的受精卵中导入了外源基因，鱼类品种包括鲤鱼、鲍鱼、蹲鱼、鲑鱼和罗非鱼等。 转基因鱼类型 根据基因转化的目的不同，转基因可分为3类： 一、使鱼获得某种新的有用性状； 二、使鱼丢失某种有害性状； 三、在鱼体内表达报道基因，检测启动子的活性。 转基因标记 对于第一类基因而言，转入基因载体应当含有选择性标记基因、目的基因、启动子或增强子及DNA复制起始位点； 如果是用于第二种目的，可以转入目的基因的反义基因，使某一特定的基因失活； 用于第三种目的的转基因鱼中常转入CAT基因和半乳糖苷酶基因等作为报道基因。 4、 克隆动物 1997年2月23日英国科学家Wilmut等人向全世界宣布，世界上第一只来源于体细胞的、通过克隆方式获得的克隆羊——多莉问世了。这条消息立即在生物学和非生物学界掀起了一场轩然大波，一时间“克隆”成为各媒体乃至全社会热烈讨论的焦点。 什么是“克隆”呢? 简而言之克隆就是无性繁殖系。克隆动物是指不经过生殖细胞而直接由体细胞获得新的个体。研究人员对克隆的具体定义仍然存在争议，这场争论还会持续相当长一段时间。 多莉羊的诞生 以克隆羊多莉的诞生为例，介绍通过转核法从体细胞获得新个体的过程。 由于体细胞和受精卵一样都含有全部的遗传信息，因此，从体细胞获得完整的动物个体是完全可行的。但是由于动物细胞高度分化，它是否仍然保持发育的全能性一直是学术界长期争论不休的问题。 为了证明分化后的动物体细胞是有全能性的，科学家们进行了大量的实验。最初是从胚胎细胞的核移植开始的，在成功地进行了数例胚胎细胞核移植之后，着手进行体细胞的核移植实验，研究人员发现克隆动物的成功与否取决于以下几个关键性的问题： 关键性的问题 ①核移植(nuclear transplantatlon)是否成功。 核移植过程中要首先分离得到供体细胞和作为受体的卵细胞。卵细胞在显微镜下去核后，将单个的供体细胞注射到去核卵细胞的透明质下，在仙台病毒的介导或电脉冲作用下，两者发出融合，得到重组的卵细胞。 关键性的问题 ② 要取处在适当发育阶段及细胞周期的受体和供体细胞。 在哺乳动物中，已证明发育到8细胞和16细胞的卵裂球细胞可以用作核供体，而克隆绵羊多莉的诞生则表明乳腺细胞也可以用作核供体。 细胞周期也可对核移植实验产生影响。当受体细胞与供体细胞处于细胞周期中的同一时期时，核移植成功的机率最大。 Wilmut等人在研究中还发现转核实验能否成功还与细胞诱导分裂成熟的因子(MPF，maturation／mito