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摘要：微的O2和N测定硝化生物膜滴滤池的水产养殖水再循环系统使用新开发的生物传感器,可以避免来自其它离子传统干扰。硝化作用50 um的一个狭窄的区域。在同一生物膜,垂直分布的亚硝化单胞菌属硝化菌属调查整个固定细胞的荧光原位杂交16 rRNA目标寡核苷酸探针结合共焦激光扫描显微镜。氨氧化形成一层致密的细胞集群生物膜的部,而亚硝酸盐氧化密度较低总量亚硝化单胞菌集群附近两个物种生物膜的含氧区域没有限制,但也缺氧层甚至偶尔生物膜底部。Lithoautotrophic硝化是一个两步的过程,氨,细菌的共同作用导致通过变换它会导致土壤肥料氮重大损失和地表水和地下水的硝酸盐污染另一方面,硝化作用通过反硝化作用去除污水总氮的初始步骤。重要的是要防止接收水域富营养化或至少在脱氮能避免接收水域的铵盐污染大部分鱼类有毒的因此过去的十年关注硝化细菌的生理和生态属亚硝化单胞菌和硝化菌属仍然是两个各自的步骤两个最有名的催化剂,但最近对硝化作用的研究导致新物种的隔离,并意外发现的代谢步骤各种测定硝化技术已经开发出来,如通过使用硝化抑制剂N15稀释技术或同位素配对然而,测定硝化作用和硝化细菌的精确定位仍然困难。氨和亚硝酸盐氧化是挑剔细菌的典型例子。他们缓慢增长细菌很难列举因此,原位识别方法评估。首先,技术来检测显微镜计数然而,由于大氨氧化的血清多样性和非特异性荧光抗体绑定的胞外聚合物物质,这些方法并不完全令人满意最近,分子生态学的进展使得荧光原位杂交成功16 s rRNA-targeted寡核苷酸探针应用在更复杂的环境这个背景瓦格纳等人亚硝化单胞菌属和嗜盐的的成员设计一个并成功地应用检测活性污泥中的细菌此外,两个探针硝化菌属物种已经开发出来一个新的,非常强大的复杂群落结构原位分析技术微电极引入在微生物生态学领域。传感器监测多种代谢反应这些相关分层细菌研究氮循环监测,一氧化二氮,氨、硝酸微型开发并用于调查不同的栖息地尽管HCO传感器尤其干扰,詹森等的工作提供有价值的信息硝化活性分层和调节氧和氨的影响。最近开发的生物传感器,然而,现在避免干扰离子的限制。在这项研究中,我们首次结合微断面的硝化活性和硝化细菌生物膜数据。寡核苷酸探测已经应用于生物膜研究好几次了在研究硫酸盐还原菌(SRB)滴滤池生物膜,公羊等使用这种技术SRB的分布氧的微表面,硫化和pH值研究完成另一个滴滤池生物膜处理鳗鱼养殖废水。硝化细菌的增长是由这个系统高浓度的氨和约为2稳定温度支持。化学梯度和细菌分层之间的关系描述,硝化细菌在厌氧区发生可能原因讨论生物膜样品生物膜生长在塑料箔,垂直位置滴滤池的底部。过滤器安装在生产鳗鱼水产养殖水循环生物膜水中含有各种但高浓度的NH(0.3至7mM)和(27至39mM)，NO2和N2O的值分别是0.7至11mM和0.2至0.9mM。整个都在一个封闭的黑暗的房间里,保持20到28之间一个稳定的温度。3到4个月后,生物膜已达到约200毫米的厚度所有的分析在箔片被带到实验室浸没在原位水Clark-type氧微电极90%应时间小于1和的的敏感性被用来确定在25到50米的深度O2梯度。类似的高分辨率测量NO一个新开发的生物传感器使用它是基于固定化反硝化细菌将N2O而不是N2。通过将细菌在电化学的一氧化二氮微传感器前毛细管,一氧化二氮的电极信号与硝酸的浓度成正比尺寸优化后,生物传感器线性的响应从0到300米,90%的应时间约20探测大约是3米唯一的干扰物质2和N2O,测量分别因此化学分析检查NO2一氧化二氮的和O2和一氧化二氮使用先前描述的组合微传感器是必要的取样,生物膜被转移到一原位气泡水保存在室温下, O2如前所述测量两点校准电极用100% O2饱和大体积的水和缺氧的生物膜底部的零读数与N2水相同。Revsbech和Glud等人用生物膜和微生物垫测量Ds·φ，在生物膜中的扩散系数被假定低于水中的40%。 化学分析：在分析过重新计算的NO3与NO2的比值后，水样被从滴滤池和测量装置中取出。样品被储存在零下20摄氏度直到图像光谱测量分析铵根、亚硝酸根和硝酸根。为了测量一氧化二氮，一个有电子捕捉探针的日本岛津公司的GC-14A气体色谱仪被使用。 生物膜的固定和切片：一旦经过微电极的测量，生物膜的样品将被固定在4摄氏度下准备好的新鲜多聚甲醛中一小时，随后用磷酸盐缓冲盐水冲洗。然后，样品生物膜的一边被嵌入OCT化合物中，被放在蒸发溶液N2上。当凝固时，通过轻微的弯曲结构下层生物膜从塑料薄膜被移除。随后生物膜被内嵌于底部再次凝固。为了阻止样品融化，最后一步正站在零下20摄氏度的低温恒温器中进行。在这个仪器中，10到20微米厚的垂直冷冻超薄切片被切除。截面以明胶覆盖微观切片被放置在六个杂交井中的五个里，并用风干和50%、80%及96%的乙醇脱水来固定。切片被储存在室温下只要几个星期。 参