基因工程的基本操作程序学案.doc

课题 1.2 基因工程的基本操作程序 学习目标：简述基因工程的原理和技术。 理解基因操作的工具和基本程序及应用。 学习重点和难点： 重点：提取目的基因的方法。 难点：目的基因导入受体细胞的途径。 自学测评： 基因工程的基本操作程序主要包括4个步骤：①目的基因的 ； ② 的构建； ③将目的基因 ； ④目的基因的 。 一、目的基因的获取： 1、目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的 。 2．获取目的基因的方法 （1）从基因文库中获取目的基因 ① 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因组文库：含有一种生物的 基因 ② 种类 cDNA文库：含有一种生物的 基因 ③ 目的基因的获取 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 （2）利用PCR技术扩增目的基因。 ① PCR：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 ② 过程：目的基因DNA受热形成 ，与 结合，然后在 ____的作用下进行延伸形成DNA。 ③方式：指数扩增= （n为扩增循环的次数） （3）化学方法人工合成：基因较 ，核苷酸序列 。 二、基因表达载体的构建 1、表达载体的组成：目的基因+ + +标记基因+ 。 2、启动子：位于基因的 ，它是 结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 3、终止子：位于基因的 ，终止 。 4、标记基因： 受体细胞是否含有目的基因。 5、表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 给下一代；使目的基因 ____和发挥作用。 6、不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法 ，基因表达载体的构建上也会有所差别。 三、将目的基因导入受体细胞 （一）转化：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和 的过程。 （二）方法 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 ① 农杆菌特点：易感染 植物和裸子植物，对___________植物没有感染力；Ti质粒的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 ② 转化：目的基因插人 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 （2）基因枪法:是 植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 （3）花粉管通道法 2．将目的基因导入动物细胞 （1）方法： 。 （2）操作程序：目的基因表达载体 →取 →显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到_ ___性动物的 ____ _____内发育→新性状动物。 3．将目的基因导人微生物细胞 （1）原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 （2）转化： 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→ ___ 细胞吸收DNA分子。 四、目的基因的检测与鉴定 类型 步骤 检测内容 方法 结果显示 水平检测 第一步 目的基因是否进入受体细胞 ? 是否成功显示出杂交带 第二步 目的基因是否转录出mRNA ? 是否成功显示出杂交带 第三步 目的基因是否翻译出蛋白质 ? 是否成功显示出杂交带 水平鉴定 ? 合作探究、精讲点拨： 探究一 目的基因的获取 1、基因文库 文库 文库2．原核细胞和真核细胞的基因结构? （1）原核细胞的基因结构 （2）真核细胞的基因结构 3.PCR技术 原理： 前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成 条件： 、 、 、 、